[发明专利]生物样本的预处理方法、RNA的检测方法及预处理试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及包含RNA的生物样本的预处理方法、RNA的检测方法及预处理试剂盒。

背景技术

作为检测血液等生物样本中的病毒的方法，有将病毒的基因进行扩增从而检测的方法。但是，生物样本中大多含有基因扩增的抑制物质，因此在基因扩增之前，实施对生物样本进行预处理而将抑制物质除去或钝化的操作。预处理方法例如有：通过表面活性剂、促溶剂、加热等对生物样本进行处理后，进一步通过固相载体或离子交换树脂进行纯化的方法(专利文献1～3)。然而，这些方法需要特殊的装置，并且需要多个操作步骤，因此繁杂。

特别是在以RNA为基因的病毒的检测中，为了通过反转录酶使RNA基因成为DNA后进行扩增操作，需要将RNA分解酶(RNase)及反转录酶钝化物质也除去或钝化，因此在现有的预处理方法中，进一步需要繁杂的操作。例如作为包含RNA病毒的生物样本的预处理方法，已知添加多胺或硫酸化多糖(专利文献4)。然而，添加多胺或硫酸化多糖会使预处理更加繁杂化，并且多胺及硫酸化多糖可能和RNA基因及通过反转录酶而生成的DNA结合，反而也可能抑制基因扩增。

另外，流感病毒为RNA病毒的一种，但是流感病毒是新型还是季节型的判断在临床上极为重要。另外，通常使用鼻粘膜作为用以检测流感病毒的生物样本。并且，流感病毒的检测需要在临床现场进行。因此，期望建立使用人类的鼻粘膜的流感病毒的迅速且简便的检测方法，这类需求并不限于流感病毒，也要求针对通常的RNA病毒的检测，而且不仅要求针对RNA病毒的检测，也要求针对基因以外的RNA本身的检测。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：特开2009-247250号公报

专利文献2：国际公开WO2007/094506号公开文本

专利文献3：特开2006-87394号公报

专利文献4：特开2001-29078号公报

发明内容

发明要解决的问题

本发明的目的是提供能够由包含RNA的生物样本迅速且简便地检测RNA的生物样本的预处理方法、使用该生物样本的预处理方法的RNA的检测方法、及所述生物样本的预处理方法中所用的预处理试剂盒。

解决问题的手段

本发明的预处理方法是包含RNA的生物样本的预处理方法，其特征在于：所述生物样本包含乳铁蛋白(Lactferrin)，并对所述生物样本实施乳铁蛋白的RNA分解活性抑制处理。

本发明的检测方法是生物样本中的RNA的检测方法，其特征在于所述生物样本包含乳铁蛋白(Lactferrin)，并且包括：对所述生物样本进行预处理的预处理步骤，及通过扩增而检测经所述预处理的生物样本中的所述RNA的RNA扩增检测步骤，所述预处理步骤通过所述本发明的生物样本的预处理方法而实施。

本发明的预处理试剂盒是包含RNA的生物样本的预处理试剂盒，其特征在于：所述生物样本包含乳铁蛋白(Lactferrin)，所述预处理试剂盒包含乳铁蛋白的RNA分解活性抑制剂。

发明效果

本发明者等人首先发现：抑制人类鼻粘膜样本中所含的以RNA为模板的反转录/DNA扩增反应的要素是乳铁蛋白的RNA分解活性。并且发现，通过仅对人类鼻粘膜样本实施乳铁蛋白的RNA分解活性抑制处理(例如乳铁蛋白的RNA分解活性抑制剂添加处理)，可以抑制RNA分解。进一步发现，作为人类鼻粘膜样本中所存在的其他反转录/DNA扩增反应抑制要素之一，溶菌酶C抑制通过反转录酶从RNA向DNA的反转录反应。并且发现，通过添加溶菌酶C的反转录酶抑制活性抑制剂，可以抑制反转录酶的抑制活性。并且通过这些反转录/DNA扩增反应抑制要素的抑制处理(添加包含抑制剂的试剂)而对人类鼻粘膜样本进行处理，其结果是，不经过特别的纯化步骤，便可以直接进行RNA基因的扩增，从而完成了本发明。根据本发明，可以迅速且简便地从包含RNA的生物样本检测RNA。

附图说明

图1是表示本发明的检测方法的一个实例的图。

图2是表示乳铁蛋白及溶菌酶C存在于人类鼻粘膜中的电泳照片。

图3是表示铁离子及碳酸根离子对乳铁蛋白的RNA分解活性的抑制效果的电泳照片。

图4是表示铁离子及碳酸根离子的热处理效果的一个实例的电泳照片。

图5是表示通过铁离子及碳酸根离子对溶菌酶C的反转录抑制活性进行抑制的一个实例的图。

图6是表示铁离子及碳酸根离子和SDS的协同效应的一个实例的电泳照片。