[发明专利]氧化应激指示物表达用核酸构建物及其应用

权利要求书

1. 氧化应激指示物表达用核酸构建物，其包含：编码使Nrf2蛋白中至少包含Neh2结构域序列、并且使Neh1结构域序列或Neh1-Neh3结构域序列实质上缺失或丧失功能而成的部分蛋白质的核酸序列，配置于该核酸序列的上游的应激诱导性启动子序列，和配置于该核酸序列的下游的、编码能发出可检测信号的蛋白质的核酸序列。

2. 权利要求1所述的核酸构建物，其中，部分蛋白质包含从Nrf2蛋白中使Neh1结构域序列或Neh1-Neh3结构域序列实质上缺失而成的氨基酸序列。

3. 权利要求1或2所述的核酸构建物，其中，Nrf2蛋白是来源于哺乳动物的Nrf2。

4. 权利要求3所述的核酸构建物，其中，来源于哺乳动物的Nrf2是人Nrf2或小鼠Nrf2。

5. 权利要求1～4中任一项所述的核酸构建物，其中，部分蛋白质包括：(a)由序列编号1(人)或序列编号2(小鼠)的Nrf2蛋白的氨基酸序列中的1位～93位氨基酸构成的Neh2结构域序列，(b)与该Neh2结构域序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列，或者(c)在该Neh2结构域序列中包含1个或多个氨基酸的缺失、置换或添加的氨基酸序列。

6. 权利要求1～4中任一项所述的核酸构建物，其中，部分蛋白质包括：(d)由序列编号1(人)或序列编号2(小鼠)的Nrf2蛋白的氨基酸序列中的1位～433位氨基酸或1位～425位氨基酸各自构成的、包含Neh2-Neh6结构域序列的氨基酸序列，(e)与该包含Neh2-Neh6结构域序列的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列，或者(f)在该包含Neh2-Neh6结构域序列的氨基酸序列中包含1个或多个氨基酸的缺失、置换或添加的氨基酸序列。

7. 权利要求1～6中任一项所述的核酸构建物，其中，应激诱导性启动子由抗氧化剂应答元件(ARE)、或ARE与启动子的组合构成。

8. 权利要求7所述的核酸构建物，其中，ARE由多次重复构成。

9. 权利要求1～8中任一项所述的核酸构建物，其中，所述核酸构建物在其3'末端包含标签编码序列。

10. 权利要求9所述的核酸构建物，其中，标签编码序列是Flag标签编码序列。

11. 载体，其包含权利要求1～10中任一项所述的核酸构建物。

12. 细胞，其包含权利要求1～10中任一项所述的核酸构建物或权利要求11所述的载体。

13. 非人动物，其包含权利要求1～10中任一项所述的核酸构建物或权利要求11所述的载体。

14. 权利要求13所述的非人动物，其中，非人动物还包含内质网应激指示物表达用核酸构建物或低氧应激指示物表达用核酸构建物。

15. 用于测定氧化应激的方法，其包括在权利要求12所述的细胞或者权利要求13或14所述的非人动物中测定在提供氧化应激时增大的可检测信号的强度的步骤。

16. 筛选氧化应激抑制剂的方法，其包括如下步骤：在候选药剂的存在下对权利要求12所述的细胞或者权利要求13或14所述的非人动物提供某种特定的氧化应激，当可检测信号的强度与不存在该候选药剂的对照相比有所减小时，判定为该候选药剂具有氧化应激抑制能力。