[发明专利]预防或抑制肠病的二唾液酸乳-N-四糖（DSLNT）或其变体、异构体、类似物和衍生物

说明书

贯穿本申请，引用了多个公开物。这些公开物的公开内容通过引用的方式整体并入本申请，以更全面地描述本发明所属领域的现状。

本发明是在NIH/NIDDK颁布的K99/R00DK078668号基金下，经由政府支持而做出的。政府对本发明享有一定权利。

背景技术

坏死性小肠结肠炎（NEC）是早产儿中最频发和致命的肠病之一。几乎10%的极低出生体重儿（出生体重<1,500g）会患上NEC。其中超过25%死于该病症。存活者经常面临长期的神经损伤。Lucas和Cole（Lancet,336:1519-23）在1990年就已经报道过，相比于母乳喂养的婴儿，配方喂养的婴儿患上NEC的风险高6～10倍。之后，将人乳中的一些分子（例如LC-PUFA、PAF-AH、EGF）与NEC防护相关联，主要是基于动物研究。然而，尽管在过去的10～15年中在配方组成方面有所改进，配方喂养的婴儿仍然处于比母乳喂养婴儿高6～10倍的风险。数据表明，人乳还含有配方中缺少的并保护母乳喂养的婴儿免患NEC的某些物质。对人乳中防治性成分以及其作用机制的鉴定，将为迫切需求的治疗甚至预防这种毁灭性病症的其它选择的开发铺平道路。

我们已发现，某些人乳低聚糖（HMO）保护母乳喂养的婴儿免患NEC。因此，我们提供含有此HMO的制剂，用于抑制例如NEC的肠病的方法和手段。

发明内容

根据本发明，已经发现可用于多种治疗应用的新型制剂。本发明提供包含分离的二唾液酸乳-N-四糖（DSLNT）或其变体、异构体、类似物和衍生物（本发明的DSLNT）的制剂。

本发明还提供通过在受试者中以足以预防或治疗肠病和/或炎症的量施用二唾液酸乳-N-四糖（DSLNT）或其变体、异构体、类似物和衍生物，从而预防或治疗患有肠病和/或炎症的受试者的方法。

本发明还提供鉴定母乳喂养婴儿是否处于患上坏死性小肠结肠炎（NEC）的风险的方法，包括测定母乳中二唾液酸乳-N-四糖（DSLNT）的浓度，其中低水平的DSLNT预示着该母乳喂养婴儿处于患上NEC的风险。

附图说明

图1.HMO和GOS。乳糖（Galβ1-4Glc）形成人乳低聚糖（HMO，左侧）的还原端，并且可以在非还原端经一个或多个乳糖胺（lactosamine）二糖（Galβ1-3/4GlcNAc）而延长，生成不同大小的HMO。乳糖或聚乳糖胺骨架可以通过以多种连接键（linkage）添加岩藻糖和/或添加唾液酸（在人中为N-乙酰基-神经氨酸）而进行修饰。各个唾液酸为HMO贡献一个负电荷。在结构上与HMO极为不同的低聚半乳糖（GOS，右侧）通过半乳糖延伸，并且没有岩藻糖和唾液酸。

图2.HMO在新生大鼠中预防NEC。A：四天存活率。HMO（10mg/mL）复原存活率而GOS（8mg/mL）没有效果。注意，x轴相交于50%存活率。B：H&E染色的回肠切片的病理得分（0：健康；4：完全破坏）。以低浓度（1mg/mL）和高浓度（10mg/mL）添加HMO，显著地降低得分。GOS（8mg/mL）没有效果。各点表示一个动物。线表示均值和标准差。[BF：母乳喂养；FF：配方喂养]。

图3.二级色谱鉴定最有效的HMO。A：按电荷进行HMO分级后的大鼠NEC。汇集的HMO通过QAE基于电荷而分级。不含唾液酸的HMO不带电（0）。具有一个或多个唾液酸的HMO携带一个或多个负电荷（-1、-2、…）。QAE-2级分对预防NEC最有效。B：HPLC-FL显示出，QAE-2仅含4种主要低聚糖。#1是单唾液酸化HMO，其被认为是无关的QAE-1级分溢出，没有效力。C：按尺寸进行的FPLC P2进一步分级。汇集仅含#2（31-40）的级分并将其与仅含#3和#4的级分分离开。#3和#4不能彼此分离。相应地考虑被排除在外的组分的损耗。D：FPLC进一步分级后的大鼠NEC。尽管#3和#4没有效果，但#2使NEC显著下降。[BF：母乳喂养；FF：配方喂养]。

图4.防治性HMO#2被鉴定为二唾液酸乳-N-四糖。多糖结构解析鉴定出HMO#2是二唾液酸乳-N-四糖（DSLNT）的特定异构体。