[发明专利]具有改善的热稳定性的逆转录酶

权利要求书

1.一种具有改善的热稳定性的逆转录酶，所述逆转录酶通过用其它氨基酸置换选自于由下述氨基酸所组成的组中的一个或多个氨基酸而提供：由SEQ.ID.NO:1表示的M-MLV来源的逆转录酶的氨基酸序列的第63位的谷氨酰胺（Q63）、第264位的赖氨酸（K264）、第295位的赖氨酸（K295）、第306位的苏氨酸（T306）、第346位的谷氨酸（E346）、第408位的脯氨酸（P408）、第438位的组氨酸（H438）以及第454位的天冬酰胺（N454）。

2.根据权利要求1所述的逆转录酶，其中，所述氨基酸的置换包括选自于由下列置换所组成的组中的一种或多种置换：用亮氨酸置换由SEQ.ID.NO:1表示的野生型逆转录酶的第63位的谷氨酰胺（Q63L）、用亮氨酸置换第264位的赖氨酸（K264L）、用谷氨酰胺置换第295位的赖氨酸（K295Q）、用亮氨酸置换第306位的苏氨酸（T306L）、用甲硫氨酸置换第346位的谷氨酸（E346M）、用谷氨酸置换第408位的脯氨酸（P408E）、用酪氨酸置换第438位的组氨酸（H438Y）以及用苯丙氨酸置换第454位的天冬酰胺（N454F）。

3.根据权利要求2所述的逆转录酶，其中，所述逆转录酶具有选自于分别由SEQ.ID.NO:2-SEQ.ID.NO:9表示的氨基酸序列所组成的组中的氨基酸序列。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的逆转录酶，其中，相比于具有由SEQ.ID.NO:1表示的氨基酸序列的野生型M-MLV逆转录酶，所述逆转录酶在60℃-70℃的反应温度下表现出较高的逆转录活性。

5.一种编码权利要求1所述的具有改善的热稳定性的逆转录酶的基因。

6.根据权利要求5所述的编码所述逆转录酶的基因，其中，所述基因为编码如下突变逆转录酶的基因：

所述突变逆转录酶包含选自于如下氨基酸所组成的组中的一种或多种氨基酸的置换：由SEQ.ID.NO:1表示的M-MLV来源的逆转录酶的氨基酸序列的第63位的谷氨酰胺（Q63）、第264位的赖氨酸（K264）、第295位的赖氨酸（K295）、第306位的苏氨酸（T306）、第346位的谷氨酸（E346）、第408位的脯氨酸（P408）、第438位的组氨酸（H438）以及第454位的天冬酰胺（N454）。

7.根据权利要求6所述的编码所述逆转录酶的基因，其中，所述基因为编码如下突变逆转录酶的基因：

所述突变逆转录酶包含选自于由下列氨基酸置换所组成的组中的一种或多种氨基酸置换：用亮氨酸置换由SEQ.ID.NO:1表示的野生型逆转录酶的第63位的谷氨酰胺（Q63L）、用亮氨酸置换第264位的赖氨酸（K264L）、用谷氨酰胺置换第295位的赖氨酸（K295Q）、用亮氨酸置换第306位的苏氨酸（T306L）、用甲硫氨酸置换第346位的谷氨酸（E346M）、用谷氨酸置换第408位的脯氨酸（P408E）、用酪氨酸置换第438位的组氨酸（H438Y）以及用苯丙氨酸置换第454位的天冬酰胺（N454F）。

8.根据权利要求7所述的编码所述逆转录酶的基因，其中，所述基因具有选自于分别由SEQ.ID.NO:11-SEQ.ID.NO:18表示的核苷酸序列所组成的组中的核苷酸序列。

9.一种包含权利要求5所述的基因的表达载体。

10.一种用权利要求9所述的表达载体转化的转化子。

11.一种用于逆转录的试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1所述的具有改善的热稳定性的逆转录酶。