[发明专利]使用内部对照定量人类DNA的方法

权利要求书

1.用于定量和/或检测样品中基因组的一种或多种核酸的方法，其中在扩增反应中，

a.对第一核酸进行扩增，被扩增的基因座是基因组中的多拷贝基因座（MCL），其中所述基因座在80个碱基对的区段内与SEQ ID NO.1的序列具有至少80%的序列同一性，并且其中所述多拷贝基因座在至少两个不同染色体上具有拷贝，

b.还对作为内部对照（IC）添加的第二核酸进行扩增，

c.测定来自于所述第一核酸的扩增的扩增产物的量。

2.权利要求1的方法，其中另外对第三核酸进行扩增，所述基因座是人类Y染色体上的多拷贝基因座（MCL-Y），其中所述基因座在80个碱基对的区段内与SEQ ID NO.15的序列具有至少80%的序列同一性，

a.对作为内部对照添加的所述第三核酸进行扩增，以及

b.测定来自于所述第一核酸和第三核酸的扩增的扩增产物的量。

3.权利要求1或2的方法，其中还测定所述第二核酸的扩增产物的量。

4.权利要求1至3的方法，其中扩增方法是聚合酶链反应或实时PCR反应，并且所测定的核酸的量，在扩增过程期间测定或在扩增反应结束时作为终点测量值测定。

5.前述权利要求任一项的方法，其中所述第一核酸（MCL）和/或第三核酸（MCL-Y）的扩增产物的长度在60个碱基对至200个碱基对之间。

6.前述权利要求任一项的方法，其中所述第二核酸（IC）的扩增产物在60至400个碱基对之间。

7.权利要求6的方法，其中所述第二核酸（IC）的扩增产物在100至400个碱基对之间。

8.前述权利要求任一项的方法，其中所述第二核酸（IC）的扩增产物长于所述第一核酸（MCL）的扩增产物。

9.权利要求1至7的方法，其中所述扩增反应包含：

a.pH在8至8.8之间的Tris-HCl，和/或,

b.选自氯化钾和硫酸钾的钾盐，和/或，

c.铵盐，优选为氯化铵或硫酸铵，和/或

d.氯化镁，和/或

e.热启动聚合酶。

10.前述权利要求任一项的方法，其中所述扩增反应包含所述第二核酸（IC）的100至5000个之间的拷贝。

11.用于扩增第一核酸（MCL）的引物，其选自

a.5′-CCGGGAAGCAGAAGGTGG-3′（SEQ ID NO.12/4N-S1C Pr）

b.5′-Fam-CGAGCTCAGTTGTGCCTGTAGAGCTCG-dabcyl-C18-ACCTCTTCCTCTTGGCTGGG-3′（SEQ ID NO.11/4N-S1C）。

12.用于扩增第三核酸（Y-MCL）的引物，其选自

a.5′-TGGCTGAGTTCCTCCACCTG-3′（SEQ ID NO.37/MCL-Y Pr）

b.5′-Quasar670-cgaccgtgaagcatgcgtttcggtcg-BHQ2-C18-agtgggagagctgggaa-3′（SEQ ID NO.38/MCL-Y Scorp）。

13.用于扩增第一核酸（MCL）的引物对，其由权利要求11的引物构成。

14.用于扩增第三核酸（Y-MCL）的引物对，其由权利要求12的引物构成。

15.用于扩增第二核酸（IC）的引物，其选自

a.5′-GCTATCCAGTGTGCCTAGGCAA-3（SEQ ID NO.13/AT-IC_Rev.）

b.5′-YAK-TGGCGTAGTCGTTCAACGCCA/Dabcyl/HEG/CCACGAGCGTACTTCGACTGAA-3（SEQ ID NO.14/AT-IC_Yak）。

16.用于扩增第二核酸（IC）的引物对，其由权利要求15的引物构成。