[发明专利]核心蛋白聚糖组合物及其用途

权利要求书

1.一种产生非糖胺聚糖化核心蛋白聚糖核心蛋白的方法，包括：

提供表达非糖胺聚糖化核心蛋白聚糖核心蛋白的宿主细胞；

培养所述宿主细胞使得产生所述非糖胺聚糖化核心蛋白聚糖核心蛋白；以及

纯化所述非糖胺聚糖化核心蛋白聚糖核心蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述非糖胺聚糖化核心蛋白聚糖核心蛋白分泌到用于培养所述宿主细胞的培养基中。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述纯化包括将所述培养基与离子交换介质接触。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述纯化包括将所述培养基与羟基磷灰石介质接触。

5.根据权利要求2所述的方法，其中所述纯化包括将所述培养基与至少一种离子交换介质和至少一种羟基磷灰石介质按任何顺序接触。

6.根据权利要求2所述的方法，其中所述纯化包括：

将所述培养基与阳离子交换介质接触；

洗涤所述阳离子交换介质；

从所述阳离子交换介质中洗脱第一含核心蛋白聚糖的洗出液；

将所述第一含核心蛋白聚糖的洗出液与羟基磷灰石介质接触；

洗涤所述羟基磷灰石介质；

从所述羟基磷灰石介质中洗脱第二含核心蛋白聚糖的洗出液。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述阳离子交换介质为SP-琼脂糖FF。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述羟基磷灰石介质为陶瓷羟基磷灰石I型。

9.根据权利要求6所述的方法，还包括用离子交换膜或柱进一步纯化所述第二含核心蛋白聚糖的洗出液。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述离子交换膜为Q离子交换膜。

11.根据权利要求6所述的方法，还包括病毒灭活步骤。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述病毒灭活步骤包括用表面活性剂处理。

13.根据权利要求2所述的方法，其中所述表面活性剂为Triton X-100。

14.根据权利要求6所述的方法，还包括病毒过滤步骤。

15.根据权利要求6所述的方法，还包括浓缩所述核心蛋白聚糖。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述非糖胺聚糖化核心蛋白聚糖核心蛋白通过所述宿主细胞以约大于1、5或10pg/细胞/天的速率产生。

17.一种从含核心蛋白聚糖的培养基中纯化核心蛋白聚糖的方法，包括：

将所述含核心蛋白聚糖的培养基与阳离子交换介质接触；

洗涤所述阳离子交换介质；

从所述阳离子交换介质中洗脱第一含核心蛋白聚糖的洗出液；

将所述第一含核心蛋白聚糖的洗出液与羟基磷灰石介质接触；

洗涤所述羟基磷灰石介质；

从所述羟基磷灰石介质中洗脱第二含核心蛋白聚糖的洗出液；

用离子交换膜过滤所述第二含核心蛋白聚糖的洗出液以提供含核心蛋白聚糖的滤液；

处理所述滤液以除去病毒；

从所述滤液中浓缩核心蛋白聚糖。

18.一种包含纯化的核心蛋白聚糖核心蛋白的组合物，所述核心蛋白聚糖核心蛋白在成熟的核心蛋白聚糖核心蛋白的第4位包含突变，使得所述核心蛋白聚糖蛋白基本上非糖胺聚糖化，所述组合物在所述组合物中包含少于约100ng残余宿主细胞蛋白/mg核心蛋白聚糖核心蛋白和少于约20pg残余宿主细胞DNA/mg核心蛋白聚糖核心蛋白。

19.根据权利要求18所述的组合物，所述组合物在所述组合物中包含少于约5ng残余宿主细胞蛋白/mg核心蛋白聚糖核心蛋白和少于约5pg残余宿主细胞DNA/mg核心蛋白聚糖核心蛋白。

20.根据权利要求18所述的组合物，其中将所述核心蛋白聚糖配制成水溶液。

21.根据权利要求20所述的组合物，其中所述水溶液包含pH为约6.5至约7.5的磷酸盐缓冲溶液。

22.一种融合蛋白，其包含可操作地连接到编码核心蛋白聚糖的序列的异源信号肽。