[发明专利]使用捕获标记物的三磷酸化寡核苷酸的纯化

权利要求书

1.制备式（I）的寡核苷酸的方法，

其中V₁、V₃和V₅在每种情况中独立地选自O、S和Se；

V₂、V₄和V₆在每种情况中独立地选自OH、OR¹、SH、SR¹、F、NH₂、NHR¹、N(R¹)₂和BH₃^-M⁺，

W₁是O或S，

W₂是O、S、NH或NR²，

W₃是O、S、NH、NR²、CH₂、CHHal或C(Hal)₂，

R¹、R²和R³选自C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_2-6酰基或环基，各自任选地被取代，

或其中两个R¹可以和与其结合的N-原子一起形成环，

M⁺是阳离子，

X是NH、NR³、O或S，

Z表示捕获标记物，

Y表示连接所述捕获标记物与X的键或连接物，和

ON表示包含至少4个核苷酸或核苷酸类似物结构单元的寡核苷酸，

所述方法包括下列步骤：

（a）将式（IIa）的化合物与氧化剂反应，

其中V₁、V₃、V₅、V₄、V₆、W₁、W₂、W₃和ON如上限定，以获得式（IIb）的化合物

其中V₁、V₃、V₅、V₂、V₄、V₆、W₁、W₂、W₃和ON如上限定，

（b）将式（IIb）的化合物与式（III）的捕获标记物试剂反应，

Z-Y-XH   （III）

其中X、Z和Y如上限定，以获得包含式（I）的寡核苷酸的反应产物，和

（c）将步骤（b）的反应产物与能够与所述捕获标记物相互作用的捕获试剂接触，其中所述接触在允许寡核苷酸（I）与所述反应产物中所含的其它物质分离的条件下进行。

2.权利要求1的方法，其中所述捕获标记物和所述能够与其相互作用的捕获试剂选自：

（i）疏水性或氟化的基团和对疏水性或氟化的基团具有亲和性的色谱材料，例如，反相材料或氟亲和性支持物；

（ii）非共价结合对的第一配偶体和非共价结合对的第二配偶体，和

（iii）共价结合对的第一配偶体和共价结合对的第二配偶体，其中所述第一和第二配偶体形成共价键。

3.权利要求1或2的方法，其中三磷酸酯/三磷酸酯类似物基团与寡核苷酸的5’-端连接，特别是与其5’-端糖的5’-OH-基团连接。

4.权利要求1-3任一项的方法，进一步包括下列步骤：

（d）除去所述捕获标记物，以获得式（IV）的寡核苷酸，

其中V₁、V₃、V₅、V₂、V₄、V₆、W₁、W₂、W₃和ON如权利要求1中限定。

5.权利要求1-4任一项的方法，其中所述寡核苷酸选自脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸和寡核苷酸类似物。

6.权利要求1-5任一项的方法，其中所述寡核苷酸是单链或双链的。