[发明专利]用于制造具有改善的同质性的缀合物的方法

权利要求书

1.一种制备结合有连接子的细胞结合剂的方法，所述方法包括在约15℃或更低的温度下使细胞结合剂与双官能交联剂接触以使连接子共价连接于所述细胞结合剂并且从而制备包含结合有连接子的细胞结合剂的混合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述接触在pH值为约7.5到约9的溶液中发生。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述pH值为约7.8。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述溶液包含选自柠檬酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、琥珀酸盐缓冲剂以及磷酸盐缓冲剂的缓冲剂。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述溶液包含选自由以下组成的组的缓冲剂：HEPPSO（N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-(2-羟基丙烷磺酸)）、POPSO（脱水哌嗪-1,4-双(2-羟基-丙烷-磺酸)）、HEPES（4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸）、HEPPS（EPPS）（4-(2-羟乙基)哌嗪-1-丙烷磺酸）、TES（N-[三(羟甲基)甲基]-2-氨基乙烷磺酸）以及其组合。

6.根据权利要求1到5中任一项所述的方法，其中所述接触在约-10℃到约15℃的温度下发生。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述温度为约10℃。

8.根据权利要求1到7中任一项所述的方法，其中所述细胞结合剂选自由以下组成的组：抗体、干扰素、白介素2（IL-2）、白介素3（IL-3）、白介素4（IL-4）、白介素6（IL-6）、胰岛素、EGF、TGF-α、FGF、G-CSF、VEGF、MCSF、GM-CSF以及转铁蛋白。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述细胞结合剂为抗体。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述抗体为单克隆抗体。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述抗体为人源化单克隆抗体。

12.根据权利要求9到11中任一项所述的方法，其中所述抗体选自由以下组成的组：huN901、huMy9-6、huB4、huC242、曲妥珠单抗、比伐珠单抗、昔洛珠单抗、CNTO95、huDS6、利妥昔单抗、抗CD27L、抗Her2、抗EGFR、抗EGFRvIII、畸胎瘤衍化生长因子、抗CD138、抗CD38、抗EphA2、整合素靶向抗体、抗CD37、抗叶酸、抗Her3以及抗IGFIR。

13.根据权利要求1到12中任一项所述的方法，其中所述双官能交联剂包含N-琥珀酰亚胺酯部分、N-磺基琥珀酰亚胺酯部分、基于马来酰亚胺基的部分或基于卤代乙酰基的部分。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述双官能交联剂包含基于马来酰亚胺基的部分。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述双官能交联剂选自由以下组成的组：4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷甲酸N-琥珀酰亚胺酯（SMCC）、N-琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-羧基-(6-酰胺基己酸酯)（LC-SMCC）、κ-马来酰亚胺基十一烷酸N-琥珀酰亚胺酯（KMUA）、γ-马来酰亚胺基丁酸N-琥珀酰亚胺酯（GMBS）、β-马来酰亚胺基丙氧基-琥珀酰亚胺酯（BMPS）、ε-马来酰亚胺基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯（EMCS）、间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯（MBS）、N-(α-马来酰亚胺基乙酰氧基)-琥珀酰亚胺酯（AMAS）、琥珀酰亚胺基-6-(β-马来酰亚胺基丙酰胺基)己酸酯（SMPH）、4-(对马来酰亚胺基苯基)-丁酸N-琥珀酰亚胺酯（SMPB）以及N-(对马来酰亚胺基苯基)异氰酸酯（PMPI）、磺基-Mal、PEG₄-Mal和CX1-1。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述双官能交联剂为4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷甲酸N-琥珀酰亚胺酯（SMCC）。