[发明专利]用于制造具有改善的同质性的缀合物的方法

说明书

相关申请的交叉引用

本专利申请要求2011年3月29日提交的美国临时专利申请号61/468,997和2011年3月29日提交的美国临时专利申请号61/468,981的权益，所述临时专利申请以其全文引用的方式并入本文中。

发明背景

适用于治疗癌症和其他疾病的抗体-药物-缀合物（Antibody-Drug-Conjugate，ADC）通常由三种不同的要素构成：细胞结合剂；连接子；以及细胞毒性剂。通常所用的制造方法包括修饰步骤，其中细胞结合剂与双官能连接子在室温（约20℃）或高于室温下反应以形成共价连接于具有反应性基团的连接子的细胞结合剂；和结合步骤，其中经过修饰的细胞结合剂与细胞毒性剂反应以形成从连接子（使用反应性基团）到细胞毒性剂的共价化学键。

优化修饰步骤(细胞结合剂与连接子的反应)需要使连接子与细胞结合剂的反应最大化并且使连接子上的反应性基团与（例如）水和细胞结合剂上的反应性基团的副反应最小化。当连接子上的反应性基团是极具反应性的官能团，如马来酰亚胺时，这些副反应尤其成问题。所述副反应可能产生不合需要的反应产物，如自身交联的细胞结合剂，以及具有不能与细胞毒性剂反应的连接子的细胞结合剂。

鉴于前述内容，本领域中需要开发一种制备结合有连接子的细胞结合剂的改进方法，它产生高产量的所需种类的结合有连接子的细胞结合剂并且与大规模的制造方法相容。本发明提供了这种方法。本发明的这些和其他优势以及额外的本发明特征将从本文所提供的本发明描述中显而易见。

发明概要

本发明提供一种制备结合有连接子的细胞结合剂的方法，所述方法包括在约15℃或更低的温度下使细胞结合剂与双官能交联剂接触以使连接子共价连接于细胞结合剂并且从而制备包含结合有连接子的细胞结合剂的混合物。

在一个实施方案中，本发明提供一种制备包含化学偶合于细胞毒性剂的细胞结合剂的缀合物的方法，所述方法包括（a）在约15℃或更低的温度下使细胞结合剂与双官能交联剂接触以使连接子共价连接于细胞结合剂并且从而制备包含结合有连接子的细胞结合剂的第一混合物；（b）对第一混合物进行切向流过滤、选择性沉淀、非吸附性色谱、吸附性过滤、吸附性色谱或其组合并且从而制备结合有连接子的细胞结合剂的经过纯化的第一混合物；（c）通过在pH值为约4到约9的溶液中使结合有连接子的细胞结合剂与细胞毒性剂反应而使细胞毒性剂结合于经过纯化的第一混合物中的结合有连接子的细胞结合剂以制备包含以下的第二混合物：（i）经连接子化学偶合于细胞毒性剂的细胞结合剂，（ii）游离细胞毒性剂，以及（iii）反应副产物；以及（d）对第二混合物进行切向流过滤、选择性沉淀、非吸附性色谱、吸附性过滤、吸附性色谱或其组合，以从第二混合物的其他组分中纯化经连接子化学偶合于细胞毒性剂的细胞结合剂并且从而制备经连接子化学偶合于细胞毒性剂的细胞结合剂的经过纯化的第二混合物。

本发明的另一个实施方案提供一种制备包含化学偶合于细胞毒性剂的细胞结合剂的缀合物的方法，所述方法包括（a）在约15℃或更低的温度下使细胞结合剂与双官能交联剂接触以使连接子共价连接于细胞结合剂并且从而制备包含结合有连接子的细胞结合剂的第一混合物；（b）通过在pH值为约4到约9的溶液中使结合有连接子的细胞结合剂与细胞毒性剂反应而使细胞毒性剂结合于第一混合物中的结合有连接子的细胞结合剂以制备包含以下的第二混合物：（i）经连接子化学偶合于细胞毒性剂的细胞结合剂，（ii）游离细胞毒性剂，以及（iii）反应副产物；以及（c）对第二混合物进行切向流过滤、选择性沉淀、非吸附性色谱、吸附性过滤、吸附性色谱或其组合，以从第二混合物的其他组分中纯化经连接子化学偶合于细胞毒性剂的细胞结合剂并且从而制备经连接子化学偶合于细胞毒性剂的细胞结合剂的经过纯化的第二混合物。

本发明还包括一种包含化学偶合于细胞毒性剂的细胞结合剂的缀合物，它根据本文所描述的方法来制备。

发明详述