[发明专利]浆细胞或成浆细胞的选择方法、靶抗原特异性抗体的制备方法、新的单克隆抗体

权利要求书

1.选择与靶抗原特异性结合的浆细胞和成浆细胞中的至少一种的方法，该方法包括：

从非人动物中采集来自淋巴液、淋巴组织、血细胞样品或骨髓的细胞，在体外用靶抗原致敏所采集的来自淋巴液、淋巴组织、血细胞样品或骨髓的细胞，或者，用靶抗原对非人动物进行免疫；

从免疫成立后的非人动物中采集来自淋巴液、淋巴组织、血细胞样品或骨髓的细胞；

将上述致敏的或采集的来自淋巴液、淋巴组织、血细胞样品或骨髓的细胞和(1)标记的靶抗原以及(2)选择性地与浆细胞和/或成浆细胞结合的标记物质混合；以及

选择上述(1)标记的靶抗原和(2)标记物质所结合的细胞。

2.选择与靶抗原特异性结合的人的浆细胞和成浆细胞中的至少一种的方法，该方法包括：

从人中采集来自淋巴液、淋巴组织、血细胞样品或骨髓的细胞，在体外用靶抗原致敏所采集的来自淋巴液、淋巴组织、血细胞样品或骨髓的细胞，或者，从具有抗靶抗原抗体的人中采集来自淋巴液、淋巴组织、血细胞样品或骨髓的细胞；

将上述致敏的或采集的来自淋巴液、淋巴组织、血细胞样品或骨髓的细胞和(1)标记的靶抗原以及(2)选择性地与浆细胞和/或成浆细胞结合的标记物质混合；以及

选择上述(1)标记的靶抗原和(2)标记物质所结合的细胞。

3.靶抗原特异性抗体或抗体片段的制备方法，该方法包括：

利用权利要求1或2所述的方法选择与靶抗原特异性结合的浆细胞和成浆细胞中的至少一种细胞；

从选择的细胞中采集抗靶抗原抗体基因，鉴定其核苷酸序列；以及

根据鉴定的基因的核苷酸序列，制备上述抗体或抗体片段。

4.权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，

选择性地与浆细胞和/或成浆细胞结合的标记物质是用于浆细胞和/或成浆细胞的鉴定或分离的荧光探针，该荧光探针对细胞内质网的染色选择性高于其对内质网以外的细胞器的染色选择性，通过利用该荧光探针进行的染色，可以识别浆细胞和成浆细胞与浆细胞和成浆细胞以外的细胞。

5.权利要求4所述的方法，其中，所述荧光探针选自：(1)两亲性、阳离子型且具有中等程度的脂溶性的物质；以及(2)对显示出内质网分布的蛋白具有一定以上的亲和性的物质。

6.权利要求5所述的方法，其中，上述两亲性的两亲性指数(AI)为+6>AI>0，中等程度的脂溶性的疏水性指数(logP)为+6>logP>0，一定以上的亲和性的解离常数为0.1μM～0.1nM的范围。

7.权利要求4～6中任一项所述的方法，其中，上述内质网以外的细胞器是质膜、线粒体、高尔基体、溶酶体、过氧化物酶体、核、中心体、细胞质基质、吞噬体、核内体或聚集体。

8.权利要求4～7中任一项所述的方法，其中，上述荧光探针选自荧光标记格列本脲、荧光标记布雷菲德菌素A、荧光探针和荧光蛋白。

9.具有序列表的SEQ ID NO: 1所示核苷酸序列的抗人胰岛素的豚鼠抗体的γ链恒定区的基因或编码具有序列表的SEQ ID NO: 4所示氨基酸序列的抗人胰岛素的豚鼠抗体的γ链恒定区的肽的基因。

10.具有序列表的SEQ ID NO: 2所示核苷酸序列的抗人胰岛素的豚鼠抗体的κ链恒定区的基因或编码具有序列表的SEQ ID NO: 5所示氨基酸序列的抗人胰岛素的豚鼠抗体的κ链恒定区的肽的基因。

11.具有序列表的SEQ ID NO: 3所示核苷酸序列的抗人胰岛素的豚鼠抗体的λ链恒定区的基因或编码具有序列表的SEQ ID NO: 6所示氨基酸序列的抗人胰岛素的豚鼠抗体的λ链恒定区的肽的基因。

12.具有序列表的SEQ ID NO: 4所示氨基酸序列的抗人胰岛素的豚鼠抗体的γ链恒定区的肽。

13.具有序列表的SEQ ID NO: 5所示氨基酸序列的抗人胰岛素的豚鼠抗体的κ链恒定区的肽。

14.具有序列表的SEQ ID NO: 6所示氨基酸序列的抗人胰岛素的豚鼠抗体的λ链恒定区的肽。