[发明专利]浆细胞或成浆细胞的选择方法、靶抗原特异性抗体的制备方法、新的单克隆抗体

说明书

相关申请的相互参照

本申请主张于2011年3月30日申请的日本特愿2011－075135号的优先权，其全部内容作为公开而特别引用于此。

技术领域

本发明涉及浆细胞或成浆细胞的选择方法、靶抗原特异性抗体的制备方法、新的单克隆抗体。更详细而言，本发明涉及与靶抗原特异性结合的浆细胞或成浆细胞的选择方法、使用利用该方法得到的浆细胞或成浆细胞制备靶抗原特异性抗体的方法、以及利用该抗体制备方法新得到的新的单克隆抗体。

背景技术

目前，抗体药品开发中使用的单克隆抗体，大多是将小鼠抗体人源化而得到的抗体。其原因在于，作为单克隆抗体制作方法，确立了小鼠杂交瘤法。但是，对于作为抗体药物的靶标的人蛋白的功能性抗原表位中的多数，人-小鼠间的氨基酸序列同源性高，即使用这样的抗原对小鼠进行免疫，由于免疫耐受，也难以得到特异性高的抗体。因此，必须制作数量巨大的杂交瘤并进行筛选，直至获得具有高能力的抗体。于是，为了开发新的抗体药品，人们对尽可能与人的抗原具有不同的氨基酸序列的动物物种进行免疫，回避免疫耐受的限制，从而寻求用于高效率地生产具有高能力的单克隆抗体的方法。

以往的单克隆抗体制作广泛采用下述方法：通过使抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合，制作具有自主增殖能力的杂交瘤，再从中筛选具有产生具备靶标特异性的抗体的能力的克隆。但是，杂交瘤方法存在几个缺点。其中一个缺点是，由于杂交瘤技术是限于小鼠抗体产生细胞的方法，所以难以在其他动物物种中应用。而且，杂交瘤的筛选费时费事，这也是缺点。另外，即使进行筛选，也无法保证得到具有抗原特异性抗体产生能力的克隆，这也是个问题。

为了克服上述缺点，在人单克隆抗体的制作中，开发了应用酶联免疫斑点法(ELISPOT)的具有抗原特异性抗体产生能力的浆细胞(抗原特异性浆细胞)的鉴定法(日本特开2009－34047号公报：专利文献1(WO2009/017226、US2011/0294678A1)(它们的全部内容作为公开而特别引用于此))。该方法是将由人淋巴细胞纯化的浆细胞放入实施了特殊加工的微孔中，将由浆细胞大量分泌的抗体固定在浆细胞周围的底座上，使标记抗原与其反应，从而进行抗原特异性浆细胞的鉴定。

发明内容

但是，在上述专利文献1记载的方法中，抗原特异性浆细胞的鉴定需要特殊的装置，细胞的回收也需要非常繁杂的操作。而且，在该方法中，必须进行使用细胞表面抗原的浆细胞的纯化操作，所以无法由尚未确立浆细胞鉴定法的动物物种制作抗原特异性单克隆抗体。

因此，本发明的目的在于：克服上述缺点，提供由广泛的动物物种高效率地制作抗原特异性单克隆抗体的技术。

而且，本发明的目的还在于：利用上述新开发的制作抗原特异性单克隆抗体的技术，提供新的抗原特异性单克隆抗体。

B细胞在细胞膜上表达抗体(膜型抗体)，抗原与其结合，从而引起免疫球蛋白基因的类别转换和体细胞高频率突变，其结果，选出与抗原的亲和性增强的B细胞。该高亲和性B细胞中的一部分分化成浆细胞，成为抗体产生细胞。已知随着该分化，浆细胞通过免疫球蛋白基因的选择性剪接使膜型抗体的表达消失，使分泌型抗体大量表达(Immunological Reviews，Sarah A. Oracki, Jennifer A. Walker, Margaret L. Hibbs, Lynn M. Corcoran, David M. Tarlinton，Special Issue: B-Lymphocyte Biology，第237卷, 第1期, 第140-159页, September 2010: 非专利文献2(其全部内容作为公开而特别引用于此))。

在进行大鼠、豚鼠、兔的浆细胞分析的过程中，发明人新发现了：在由这些动物得到的浆细胞表面，有能够进行抗原结合分析的量的膜型抗体分子在表达。由此认为：通过使标记抗原与在浆细胞表面表达的高亲和性膜型抗体直接结合，有可能可以鉴定抗原特异性浆细胞。但是，在浆细胞膜上表达的抗体分子的量少，因此即使存在与标记抗原特异性结合的浆细胞，由于标记抗原的非特异性吸附而产生的噪音，也难以鉴定抗原特异性浆细胞。

作为通过使用内质网特异性荧光色素来高效率地鉴定浆细胞的方法，发明人开发了“浆细胞鉴定和分离用荧光探针以及使用该探针的浆细胞的鉴定或分离方法”，并申请了专利[WO2011/118579(其全部内容作为公开而特别引用于此)]。