[发明专利]HIV gp-120变体的快速选择方法

说明书

技术领域

本发明涉及可引发高中和抗体(neutralizing antibody，nAb)活性的免疫原的快速选择方法。本发明公开并举例说明了nAb活性增强的这些免疫原的几个实例。特别地，本发明公开了针对HIV-1Env表位的抗体亲和力增强的免疫原。

背景技术

据估计，自1982年以来全世界已有多于6千万人感染了人免疫缺陷病毒。在相同时间范围中这些感染个体中有近一半死于所产生的获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immunodeficiency Sydrome，AIDS)。虽然最近病毒传播似乎已到达稳定阶段，但是据报道在2009年仍有250万例HIV新感染。HIV仍然是主要的公共健康问题。参见UNAIDS，2010Report on the global AIDS epidemic。

HIV-1是迄今为止描述的遗传多样性最大的病毒病原体之一。HIV-1系统树有三个主要分支，M(主要)、N(新型)和O(离群)组。M组病毒是最广泛的，占全球感染的多于99％。主要基于短的env(包膜)基因序列，该组目前被分为九种不同的遗传亚型或分支(clade)(A至K)。参见McCutchan F，AIDS2000；14(S3)：S31-S44和Robertson D等，Science2000；288：55-56。

Env是变异性最大的HIV-1基因，在分支之间有多至35％的序列多样性，分支内有多至20％的序列多样性，并且在单个感染者中有多至10％的序列多样性。参见Kuiken C等，AIDS1996；10：31-37和Shankarappa R等，J.Virol.1999；73：10489-10502。分支B在欧洲、美国和澳大利亚占主导地位。参见Kuiken C等，AIDS1996；Am.J.Epidemiol.2000；152：814-822。分支C常见于非洲南部、中国和印度并且目前在全世界感染了比任何其他分支都更多的人。参见McCutchan，2000(见上文)。在非洲中部和东部以分支A和D为主。

然而，由于常见的共流行病毒(co-circulating viruse)之间的混合导致了分支间(interclade)的重组体，所以许多病毒难以归类至分支。参见Heyndrickx L等，J.Virol.200；74：363-370和McCutchan F等，Virology1999；254：226-234。一些重组形式事实上产生了重要的流行品系，称为流行重组形式(circulating recombinant form，CRF)。这些CRF中最常见的两种是在泰国发现的CRF01(AE)(其最初被归类为分支E，但是后来发现仅env是分支E而基因组的其他部分是分支A)，和非洲西部常见的AG重组形式CRF02。参见Robertson，2000(见上文)。在全球，分支A至D以及CRF01AE和CRF02AG重组体占全球感染的多于90％。

针对病毒包膜蛋白(Env)的中和抗体(nAb)是通过阻断易感细胞感染的针对HIV-1暴露的第一道获得性免疫防线。参见Kwong P等，Nature1998；393：648-659；Moore J等，J.Virol.1994；68：469-484；Moore P等，J.Virol.1996；70：1863-1872和Parren P等，AIDS1999；13：S137-S162。疫苗针对多种病毒的效力归因于其引发nAb的能力。参见Burton D，Nat.Rev.Immunol.2002；2：706-713和Zinkerangel R等，Adv.lmmunol.2001；79：1-53。然而，尽管付出了巨大的努力，但是关于开发有效HIV-1免疫原进展有限。参见Burton，2002(见上文)；McMichael A，Hanke T，Nat.Med.2003；9：874-880和Moore，1996(见上文)。这些免疫原的设计需要鉴定能够引起更好的nAb应答的表位。遗憾的是，到目前，开发引发广泛nAb应答的免疫原的所有尝试都失败了。

因此，本领域需要能够引起更好的nAb应答的新HIV-1免疫原。

发明内容