[发明专利]检测治疗性外来体的方法

权利要求书

1.一种检测治疗性外来体的方法，所述方法包括检测外来体的选自以下组的活性：（a）免疫调节活性；（b）补体抑制活性；（c）蛋白酶体活性；（d）糖酵解酶活性；（e）抗氧化活性；（f）细胞外基质（ECM）修饰活性；（g）NT5E（CD73）外生-5’-外核苷酸酶活性；（h）离子稳态活性；以及（i）分子伴侣活性。

2.根据权利要求1的方法，其中所述活性包括免疫调节活性，所述免疫调节活性通过检测表D10中所列的蛋白的活性进行检测。

3.根据权利要求1的方法，其中所述活性包括补体抑制活性，所述补体抑制活性通过检测表D1中所列的蛋白的活性进行检测。

4.根据权利要求1的方法，其中所述活性包括蛋白酶体活性，所述蛋白酶体活性通过检测表D2中所列的一个或多个，优选所有的，蛋白的活性进行检测。

5.根据权利要求1的方法，其中所述活性包括糖酵解酶活性，所述糖酵解酶活性通过检测表D3中所列的一个或多个，优选所有的，蛋白的活性进行检测。

6.根据权利要求1的方法，其中所述活性包括抗氧化活性，所述抗氧化活性通过检测表D4中所列的一个或多个，优选所有的，蛋白的活性进行检测。

7.根据权利要求1的方法，其中所述活性包括细胞外基质（ECM）修饰活性，所述细胞外基质（ECM）修饰活性通过检测表D5中所列的一个或多个，优选所有的，蛋白的活性进行检测。

8.根据权利要求1的方法，其中所述活性包括NT5E（CD73）外生-5’-外核苷酸酶活性，所述NT5E（CD73）外生-5’-外核苷酸酶活性通过检测表D6中所列的一个或多个，优选所有的，蛋白的活性进行检测。

9.根据权利要求1的方法，其中所述活性包括离子稳态活性，所述离子稳态活性通过检测表D7中所列的一个或多个，优选所有的，蛋白的活性进行检测。

10.根据权利要求1的方法，其中所述活性包括分子伴侣活性，所述分子伴侣活性通过检测表D8中所列的一个或多个，优选所有的，蛋白的活性进行检测。

11.根据前述任一项权利要求的方法，其中，如果一个活性被检测到，所述外来体可能能够：（i）抑制补体介导的细胞裂解；或（ii）减少梗死面积，例如在心肌缺血再灌注损伤的小鼠或猪模型中所检测的，或者其能够降低氧化应激，例如在过氧化氢（H₂O₂）诱导的细胞死亡的体外试验中所检测的，或（i）和（ii）二者。

12.根据权利要求11的方法，其中治疗活性包括心肌保护活性。

13.根据权利要求11的方法，其中治疗活性针对一种或多种选自以下组的疾病：心力衰竭、骨髓疾病、皮肤疾病、烧伤和退行性疾病如糖尿病、阿尔茨海默病、帕金森氏病、癌症、心肌梗死、皮肤创伤、皮肤失调、皮肤病变、皮炎、银屑病、湿疣、寻常疣、血管瘤、瘢痕瘤、皮肤癌、异位性皮炎、白塞氏病、慢性肉芽肿病、皮肤T细胞淋巴瘤、溃疡、特征是最初的损伤诱导炎症和免疫失调导致慢性组织重构的病理状况包括纤维化和功能丧失、肾缺血性损伤、囊性纤维化、鼻窦炎和鼻炎或者骨科疾病。

14.一种方法，其包括以下步骤：（a）从间充质干细胞条件培养物（MSC-CM）中分离外来体，任选地，包括从其它组分中基于分子量、尺寸、形状、组成或生物活性分离外来体，以及（b）检测所分离的外来体中的权利要求1所列的活性，优选通过检测一种或多种权利要求2至9任一项所列的蛋白质的活性。

15.一种生产外来体的方法，所述方法包括：（a）获得间充质干细胞条件培养物（MSC-CM）；（b）浓缩间充质干细胞条件培养物，例如用超过1000kDa的膜进行超滤；（c）将浓缩的间充质干细胞条件培养物进行体积排阻色谱，如使用TSK Guard柱SWXL，6x40mm或TSK凝胶G4000SWXL，7.8x300mm柱；（d）选择UV吸收的部分，例如，在220nm处，表现出动态光散射，如由准弹性光散射（QELS）检测出的；其中，步骤（d）举例包括保留时间为11-13分钟，如12分钟来洗脱收集组分；并且检测外来体中权利要求1所列的活性，优选通过检测一种或多种权利要求2至9任一项所列的蛋白质的活性。

16.一种参考附图的图1至13和如附图的图1至13中所示的基本上如下所述的方法。