[发明专利]用于从疫苗离析和量化抗原的方法

权利要求书

1.一种用于从疫苗组合物离析抗原的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)在没有去污剂和没有烷基化试剂的情况下溶解所述疫苗组合物中的所述抗原；以及

(b)通过分级分离来离析所述抗原或抗原亚型。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述溶解步骤通过还原进行。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述还原包括用二硫苏糖醇处理所述疫苗组合物。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述溶解步骤还包括用离液剂变性。

5.根据权利要求2-4的任一项所述的方法，其中所述还原还通过酸化所述抗原或抗原亚型来进行，以防止在分离的抗原亚型之间形成二硫键。

6.一种用于量化包括抗原的疫苗组合物中的抗原或抗原亚型含量的方法，所述方法包括权利要求1-5的任一项所述的方法以及量化所述抗原或抗原亚型的另一步骤。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述量化步骤在不使用抗原标准品的情况下进行。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述量化步骤使用抗原标准品进行。

9.根据权利要求7-8的任一项所述的方法，其中所述量化步骤包括通过氨基酸分析量化抗原。

10.根据权利要求3-9的任一项所述的方法，其中所述还原包括约5分钟至约20小时的孵育时间。

11.根据权利要求3-10的任一项所述的方法，其中所述还原包括约30分钟至约2小时的孵育时间。

12.根据权利要求3-11的任一项所述的方法，其中所述还原包括约1小时的孵育时间。

13.根据权利要求3-12的任一项所述的方法，其中所述还原包括约20℃至约100℃的孵育温度。

14.根据权利要求3-13的任一项所述的方法，其中所述还原包括约50℃至约90℃的孵育温度。

15.根据权利要求3-14的任一项所述的方法，其中所述还原包括约85℃的孵育温度。

16.根据权利要求4-15的任一项所述的方法，其中所述离液剂是盐酸胍、脲、硫脲、锂、高氯酸盐或硫氰酸盐。

17.根据权利要求4-16的任一项所述的方法，其中所述酸化用磷酸、盐酸、硫酸、三氟乙酸、五氟丙酸、七氟丁酸或甲酸进行。

18.根据权利要求1-17的任一项所述的方法，其中分级分离通过色谱法进行。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述色谱法是高效液相色谱法(HPLC)、反相HPLC(RP-HPLC)、离子交换HPLC(IEX-HPLC)、亲和色谱法、疏水相互作用色谱法(HIC)或尺寸排阻色谱法(SEC)。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述色谱法是反相(RP)-HPLC。

21.根据权利要求1-20的任一项所述的方法，其中所述抗原是病毒的或细菌的。

22.根据权利要求1-21的任一项所述的方法，其中所述抗原是血凝素(HA)。

23.根据权利要求1-22所述的方法，其中所述HA来自流感病毒疫苗组合物、麻疹病毒疫苗组合物、副流感病毒疫苗组合物或腮腺炎病毒疫苗组合物。

24.根据权利要求1-23的任一项所述的方法，其中所述疫苗组合物是流感病毒疫苗组合物。

25.根据权利要求23-24的任一项所述的方法，其中所述流感病毒疫苗组合物提供对选自由A型流感和B型流感组成的组的流感病毒的防护作用。

26.根据权利要求1-25的任一项所述的方法，其中所述抗原亚型是A型流感HA1、HA2、HA3、HA4、HA5、HA6、HA7、HA8、HA9、HA10、HA11、HA12、HA13、HA14、HA15和HA16与B型流感HA的任一种。

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述抗原亚型是A型流感HA亚型HA1、HA2、HA3、HA5、HA7、HA9、HA10或B型流感HA。