[发明专利]发光聚合物循环扩增

权利要求书

1.一个探测在液体试样中的被分析物的方法，包括的步骤有：

(a)获得一探针，其具有被固定在该探针梢端上的第一抗体，其中该梢端表面的直径≤5毫米；

(b)将该探针梢端浸入包含具有被分析物的样品溶液的样品容器中，将被分析物与在探针梢端的第一抗体结合；

(c)将该探针梢端浸入包含试剂溶液的试剂容器，该试剂溶液包括和一结合配对的第一成员结合的第二抗体分子以结合该试剂和被分析物；

(d)将该探针梢端浸入含第一洗液的第一洗涤容器中来洗涤探针梢端；

(e)将该探针梢端浸入含有扩增溶液的扩增容器中，该扩增溶液中含有一聚合物，该聚合物结合有至少5个分子的该结合配对的第二成员和至少25个荧光标记，以在该探针梢端上形成该被分析物，该第一抗体，该第二抗体，和该结合配对的第一和第二成员间的免疫复合体，其中该聚合物是支化的，并且其分子量至少为约一百万道尔顿，发光标记的分子量小于2,000道尔顿；(在扩增容器中横向地流动扩增溶液)

(f)将该探针梢端浸入含第二洗液的第二洗涤容器以洗涤探针梢端；

(g)重复步骤(c)至(f)1-10次，并且

(h)通过测定在探针梢端的发光信号来探测形成的免疫复合物，其中该第一抗体和该第二抗体是针对该被分析物的抗体。

2.根据权利要求1的方法，其中该梢端表面是小于等于大约2毫米。

3.根据权利要求1的方法，其中该结合配对是一个半抗原和其抗体，配位体及其受体，核酸的互补链，或凝集素和碳水化合物。

4.根据权利要求3的方法，其中该结合配对是生物素和链霉亲和素，生物素和抗生物素蛋白(avidin)，生物素和链霉亲和素，生物素和亲和素(neutravidin)，荧光素和抗荧光素，异羟基洋地黄毒苷/抗异羟基洋地黄毒苷(digioxigenin/anti-digioxigenin)，或DNP-抗-DNP。

5.根据权利要求4的方法，其中该结合配对的第一成员是生物素和该结合配对的第二成员是链酶亲和素。

6.根据权利要求1的方法，其中该聚合物是一个聚糖，一个多核苷酸，一个树状聚合物，一个多元醇，或聚乙二醇。

7.根据权利要求1的方法，其中该聚合物是交联聚蔗糖。

8.根据权利要求1的方法，其中该发光标记是一个选自青色素，香豆素，夹氧杂葸和其衍生物的荧光染料。

9.根据权利要求1的方法，其中该发光标记是选自三(双吡啶)合钌(II)，鲁米诺，吖啶酯，和氯化血红素的化学发光分子。

10.根据权利要求1的方法，其中该聚合物与5-50个结合分子和25-100个发光分子偶联。

11.根据权利要求1的方法，其中该聚合物是交联聚蔗糖并且与20-30个链酶亲和素和40-90个Cy5偶联。

12.根据权利要求1的方法，其中步骤(c)至(f)重复1-5次。

13.根据权利要求1的方法，其中步骤(c)至(f)重复2-3次。

14.一个组合物包括(a)一个具有分子量至少一百万道尔顿的支化聚合物，(b)至少5个结合分子，和(c)至少25个选自三(双吡啶)合钌(II)，鲁米诺，吖啶酯，和氯化血红素的化学发光分子；其中该结合分子和该化学发光分子附着到该聚合物上。

15.根据权利要求14的该组合物，包括5-50个结合分子和25-100个化学发光分子，其中该结合分子是抗体分子或链酶亲和素。

16.一个电化学发光系统包括：(a)长度比宽度的纵横比至少为5比1的探针，该探针具有第一和第二端，该第二端具有包覆有抗体的传感表面，和带有化学发光标记的免疫复合物结合，其中探针由一个传导材料制成并且充当工作电极来产生电化学反应；(b)一个对应电极；(c)指向该传感表面的会聚透镜；和(d)用于检测该发射化学发光标记的光学探测器；其中该会聚透镜会聚所发的光并将其引导至该光学探测器。

17.根据权利要求16的一个电化学发光系统，其中该传感表面的直径≤5mm。