[发明专利]制备纯化的干细胞组分的高安全性方法

说明书

现有技术状况

干细胞在美容和医疗的实践中获得了越来越多的关注，这与它们生成新生物组织的能力有关，由干细胞生成的新生物组织可以应用于由于各种原因失去了这些生物组织或其再生能力的病人。

特别地，成人干细胞，例如源于脂质或骨髓的干细胞，吸引了特别的关注，原因是它们具有更加可控的功效，而且可以不受适用于胚胎干细胞的道德限制的约束。

源于脂质的干细胞的一个典型应用领域是为了美容目的的组织填充：在此，需要接受美容疗法的病人捐献出其自身的一部分脂质组织（脂肪组织提取物(lipoaspirate)）；通过以下方式加工处理该脂质组织：实验室回收纯化的细胞组分，后者被注射回病人的需要进行填充的身体区域。获取到的细胞组分被称为血管基质组分（SVF），代表了从脂质组织中提取到的有核细胞的总数量。典型地，这些细胞中有10至20%是干细胞，也称为间充质干细胞。它们具有多能性，能够修复或再生多种类型的人体组织。使用自体同源的脂质组织避免了免疫反应和组织排斥的风险。此外，这些提取出来的细胞接下来可以被长时间冷冻储存在液氮中，以供干细胞提供者支配，在后续治疗时使用，包括在人体干细胞疗法中使用干细胞。

制备纯化的源于脂质组织的细胞组分的方法在现有技术中是已知的。

这些方法的步骤大体包括最初的脂质原材料的获取、干细胞成分的选择性提取、提取后的脂质基质的去除，以及最终的洗涤、纯化、和制备具有方便应用的浓度和体积的干细胞组分。这些方法，由于包括含有干细胞的材料流过若干移液管、导管、贝克离心管(beckers)等等的步骤，涉及到相当大的细菌污染和/或材料损失的风险，因此这些方法需要非常严格的规程，涉及到环境和所用不同材料的无菌性、多次洗涤以回收可能粘附的材料，上述因素均增加了方法的总成本。多次的容器转移还增加了源自不同病人的样品被无意中互换的风险，从而使最终的干细胞接受者遭受到非自体同源的干细胞被植入的风险。

上述规程还要求采集脂质原材料的操作者与分离干细胞的实验室之间严密合作和相互理解。有时原材料会装在非最优化的容器中被递送（例如太大、封装不适当、包装错误、剂量非最优化等等）：在所有这些情况下，实验室就会被迫以次最优化的起始样品进行操作，这可能会影响到最终产品的品质。

本发明的目的在于提供一种改进的方法，用来制备源于脂质组织的干细胞组分，该方法对病人来说更安全，对操作者来说更迅捷。

本发明进一步的目的在于，简化/标准化采集脂质原材料的操作者与负责干细胞分离的操作者之间的接口和协作。

本发明进一步的目的在于，减少生产纯化的细胞组分过程中所包括的步骤和操作的数量。

本发明进一步的目的在于，使得那些与干细胞使用有关的医疗/美容方法更加迅速和有效。

发明概要

本发明涉及一种获取源于脂质的干细胞组分的方法，基本上基于以下步骤：

(a)采集或接收含有干细胞的脂质组织样品；

(b)使用合适的水性缓冲液洗涤步骤(a)得到的样品；

(c)使用能够从含有干细胞的脂质组织中提取干细胞的酶培养步骤(b)得到的样品；

(d)从步骤(c)得到的产品中回收水相；

(e)对步骤(d)获得的水相进行纯化；

(f)对步骤(e)获得的水相进行滴定，并可选地对水相进行稀释以获取具有所需浓度和体积的干细胞组分最终产品。

本发明的一个必要特征在于，在贯穿至少上述步骤(a)、(b)、(c)的过程中，含有干细胞的材料在同一个采集装置（在此称为“单一采集装置”或“SCD”）内进行处理。单一采集装置的使用避免了被处理的材料与外界环境相接触，将与多次容器转移相关的被污染的风险、活性材料的损失降到最低，并且简化了获取纯化的干细胞组分所需的总体操作过程。

单一采集装置是能够吸取和排出液体的无菌容器；它以注射器为代表，但不限于注射器。单一采集装置可以具有大的灌装容量（例如20至100mL），以允许从相应的脂质材料中大规模采集干细胞。单一采集装置优选是透明或半透明的，具有一个用于指示最佳灌装量的标记，和/或用于书写或贴标签的区域，以标示样品来源。

将会从描述中明显得出，根据所涉及的特定过程步骤，单一采集装置完成了采集器（如同移液管）、相分离器、以及过程反应器的功能；因此，所有这些功能都被更加有利地执行，而不需要将样品从一个容器转移到另一个容器，和/或使得样品与外界环境相接触。