[发明专利]双特异性三链抗体样分子

说明书

发明领域

本发明涉及新型的双特异性三链抗原结合多肽及其制备方法以及在治疗和/或诊断各种疾病中的用途。本发明特别涉及能够活化免疫效应细胞的双特异性三链抗体样分子(TCA)及其在在诊断和/或治疗各种疾病中的用途。本发明特别涉及对CD3抗原复合物具有结合亲和力的双特异性三链多肽、其制备以及在癌症疗法中的用途。

发明背景

抗体对免疫效应细胞的活化

身体免疫系统起到防御感染、损伤和癌症的作用。体液免疫系统和细胞免疫系统是两个独立但相互关联的系统，两者协同工作以保护身体。体液系统由称为抗体的可溶性因子介导，所述可溶性因子中和被身体识别为外来物的产物。相比之下，细胞系统包括除去和中和外来侵入物的细胞，例如T细胞和巨噬细胞

T细胞的活化对于刺激免疫反应而言至关重要。T细胞表现出免疫特异性并且引导大多数细胞免疫反应。尽管T细胞不分泌抗体，但其需要B淋巴细胞分泌抗体。T细胞活化需要诸多细胞表面分子的参与，例如T细胞受体复合物和CD4或CD8分子。抗原特异性T细胞受体(TcR)由二硫键连接的异源二聚体、膜糖蛋白和阿尔法和贝它(α和β)链或伽马和德耳塔(γ和δ)链构成。TcR与不变蛋白的复合物(称为CD3)非共价连接。

TcR赋予抗原特异性并且CD3结构将活化信号转导给T细胞。CD3复合物包含四个亚基。它们可包含两个ζ亚基，一个ε亚基以及γ亚基或δ亚基中的任一个。抗原结合导致TCR复合物的交联和活化。T细胞受体信号传导导致T细胞活化和IL-2产生以及在复杂过程中产生其它细胞因子。

TcR的配体是靶细胞(如病毒感染的细胞)表面上的MHC-肽复合物。在识别靶细胞上的MHC-肽之后，T细胞可对靶细胞具有细胞毒性作用或凋亡作用。尤其是细胞毒性T细胞(CD8阳性T细胞)可通过直接除去病毒感染细胞而具有有利的作用。细胞免疫反应的这种防护(arm)是特别有利的，并且对于对抗病毒感染和消除肿瘤细胞而言至关重要。

细胞毒性T细胞的活化可通过直接结合CD3抗原来进行，而无需通过TcR对MHC-肽复合物进行识别。这种替代活化途径可通过抗-CD3抗体来实现。已针对一些抗CD3链(亚基)开发了非人单克隆抗体，如鼠抗体OKT3、SP34、UCHT1或64.1所例示。(参见例如，June等人，J.Immunol.136:3945-3952(1986)；Yang等人，J.Immunol.137:1097-1100(1986)；和Hayward等人，Immunol.64:87-92(1988))。

许多这些抗-CD3抗体结合导致形成高度活化T细胞的ε链。使用普通的单克隆抗体的癌症免疫疗法不能活化T-淋巴细胞，因为这些细胞缺乏Fcγ受体。因此，识别人CD3的一个臂和识别肿瘤抗原的另一个臂在体外动物癌症模型中具有较高的细胞毒性潜力。在临床试验中，极低剂量的BiTE抗体在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkins lymphoma)患者中是有效的(Bargou等人，Science321，第974-977页，2008)。最低有效剂量为约0.015mg/m²/天(毫克/平方米体表面积/天)，比普通抗体低几个数量级。

CD3抗体公开于（例如）美国专利号5,585,097；5,929,212；5,968,509；6,706,265；6,750,325；7,381,803；7,728,114中。具有CD3结合特异性的双特异性抗体公开于（例如）美国专利号7,262,276；7,635,472和7,862,813中。

双特异性抗体

双特异性抗体在治疗和检测癌症方面已表现出明显优于单特异性抗体的有益效果。有效／低成本的制备方法、双特异性多肽稳定性的缺乏和人体内长半衰期的缺乏妨碍了双特异性抗体的广泛商业应用。在过去的几十年，已开发了多种方法来制备双特异性单克隆抗体(BsMAB)。