[发明专利]用于制备3,5-二碘-O-[3-碘苯基]-L-酪氨酸的硫酸化衍生物的方法

说明书

发明领域

本发明的领域涉及用于制备甲状腺激素的硫酸化衍生物或其盐的方法。

发明背景

甲状腺激素三碘甲状腺原氨酸(3，5-二碘-O-[3-碘苯基]-L-酪氨酸或T3)是代谢的最有活性的甲状腺激素。如同甲状腺素(T4)，其是甲状腺生理学生成的，且与其甲状腺球蛋白形式(一种糖蛋白前体)一起被贮存。平均而言，一个甲状腺球蛋白分子包含三或四个T4残基和至多一个T3残基。TSH生成通过酶组织蛋白酶D、B和L活化甲状腺球蛋白蛋白水解，释放甲状腺激素T3和T4。然而，T3生成不限于该机制：实际上，在外周组织中，甲状腺素转化成三碘甲状腺原氨酸(80％的三碘甲状腺原氨酸是由甲状腺素外周生成的，20％是由内部甲状腺生成的)。

T3的重要性不仅在于其是唯一最有活性的甲状腺激素的事实。实际地，在这方面，已知由于其不足可引起多种病理学病症。特别地，例如，在胚胎发育期间和童年期的神经组织中，T3缺乏会导致脑和小脑皮层生长、轴突增殖、细胞迁移、髓鞘形成、树突分支和突触形成的减少。由于在生命初期T3缺乏，观察到神经系统发育延迟，接着观察到认知缺陷和运动缺陷，其可引起一种称为白痴病的临床现象。而且，在成年人中，已经通过脑PET证实，当三碘甲状腺原氨酸水平降低时，大脑内血流量和大脑葡萄糖代谢较低。这些数据可以解释甲状腺机能减退的个体中心理运动性缺陷。

除了在神经组织中观察到的影响之外，也已知在骨组织中观察到影响，其中三碘甲状腺原氨酸刺激软骨内成骨，因而经由骨骺骨中心成熟产生线性更长的骨。即使三碘甲状腺原氨酸不是出生后骨线性生长所必需的，其也是适宜的胎儿骨发育必不可少的。

而且，已经证实了T3在表皮组织中的作用，其中三碘甲状腺原氨酸不仅参与皮附件的成熟，而且参与其分解从而促进细胞再生。因此，该激素的过量和不足都可引起皮肤病学问题。

因此，T3甲状腺激素可以肯定地被认为是一种多效激素，其除了具有上述作用之外还具有已确证的作用，在血液组织中，其增加红细胞生成素生成，并因而促进血生成；在脂肪组织中，其促进前脂肪细胞向脂肪细胞的成熟，增加脂肪酸脂解，最后还调节胆固醇代谢。

通过自身免疫病理学非常频繁地产生的甲状腺机能减退相当普遍：实际地，在意大利人中的患病率，女性为约1.5％，男性为1％。通过替代疗法以令人满意地方式对其进行药理学治疗，所述替代疗法主要是基于合成性左旋甲状腺素(T4)，选择该药物是因为其更有活性的形式即T3的半衰期非常短，为此通常不能使用。

然而，采用左旋甲状腺素治疗还显示出一些与如下事实相关的缺点：虽然血浆的甲状腺得到恢复，组织的却不一定得到恢复。药理学替代物的研究，比如在EP1560575B中描述的基于拟甲状腺素T3活性可提出的替代物，可能代表目前选择治疗的期望替代物。

然而，就涉及的T3S而言，主要障碍似乎表现为难于实现大规模合成。实际地，迄今为止，仅仅以实验室规模制备T3S是可能的。

在这点上，已经描述了利用大量过量的硫酸化试剂例如浓硫酸(H₂SO₄)或氯磺酸(CSA)由T3制备T3S，例如在US2970165和Biochim.Biophys.Acta，33，461(1959)中，其描述了在低温下，利用直接加入浓硫酸由固体形式的T3制备T3S。

Endocrinology，Vol.117，No.1，1-7(1985)和Endocrinology，Vol.117，No.1，8-12(1985)预期利用在冷却下在二甲基甲酰胺中加入氯磺酸(CSA)溶液，接着通过Sephadex LH-20的纯化步骤，由T3合成T3S。

然而，迄今为止，没有任何现有技术的方法可以放大用于于纯形式的最终产物的克计产出，主要是因为报道的纯化方步需要极大体积。

有利地，现在发现在DMAC的存在下，用氯磺酸(CSA)作为硫酸化试剂由三碘甲状腺原氨酸开始硫酸化反应得到高转化率。而且，可以采用比已知的现有技术方法报道的更小体积进行纯化。最终，产物T3S可以以必需的数量和质量(数百克)被纯化至其临床用途所需的水平，并且是在工业规模可适用的情况下。

此外，因为迄今为止，只描述检测血清中T3S水平的放射性分析，比如在Chopra et al.(J.Clin.Endocrinol.Metab.，1992，75：189-194)中描述的RIA，需要基于例如非放射性试剂的更安全的免疫分析法。使用这类试剂也允许临床和/或研究机构进行这些测量。为此目的，开发了非放射性免疫分析法，并且其属于本发明的一部分。