[发明专利]分析受试者的血液样品存在疾病标记物的方法

说明书

技术领域

本发明属于医学诊断领域，特别属于疾病诊断和监控领域。本发明涉及用于检测疾病的标记物、用于检测疾病的方法及用于确定疾病治疗有效性的方法。

背景技术

在临床实践中，非常需要能够在疾病的最早期检测到疾病、能够预测疾病的发展及能够实现为患者量身定制的疗法。特别是肿瘤病（癌症）的早期检测对确保疾病的有利治疗起到关键作用。尽管医学研究有很多发展，但癌症仍然是在世界范围内导致死亡的主要原因。当患者寻求治疗时，他们通常显示出远处转移灶的症状，这意味着太频繁地发生太晚检测到癌症的事件。

肺癌、前列腺癌、乳腺癌和结直肠癌是最常见的肿瘤，且为了辅助外科切除、放射治疗、化学治疗或其它已知的治疗方法采取适当的补救措施，需要一种快速简单的方法用于癌症的早期诊断。用于癌症的良好诊断方法的可用性对于评定患者对治疗响应，或评定由于在原发位置或转移灶重新生长所带来的复发也是很重要的。

目前已知几种类型的癌症标记物，例如致癌基因产物、生长因子和生长因子受体、血管生成因子、蛋白酶、附着因子和肿瘤抑制基因产物等，且这几种类型的癌症标记物不仅认为对早期诊断是必需的，而且对以下诊断也是必需的：差别诊断患有不确定临床畸形的患者，例如用于区分良性畸形和恶性畸形；用于预测患有确定恶性肿瘤的特定患者对治疗所选择的疗法响应的可能性；且用于提供关于人类或动物受试者中患恶性肿瘤的风险、恶性肿瘤的存在或恶性肿瘤的未来行为。目前，通过肿瘤或癌症标记物的检测来检测和诊断癌症的能力是普遍感兴趣的领域，因而需要有在患者样本中识别新的且更多的癌症标记物的可再现且可靠的方法。

成胶质细胞瘤是人类中最常见且攻击性最强的类型的原发性脑肿瘤，这种疾病难以诊断，且甚至更难以治疗，这部分是因为阻碍治疗试剂递送和阻碍潜在的重要诊断标记物检测的血脑屏障。用于成胶质细胞瘤的诊断标记物是可获得的，但对肿瘤组织自身是特异性的，且需要肿瘤样品。

需要改善的筛选和检测方法以在早期阶段检测癌症和追踪疾病的发展。在癌症的情况中，我们处于如下状态：我们不仅需要检测肿瘤，还需要在它到达不能恢复的点（其中治疗变成缓解性治疗而不是治愈性治疗）之前检测到它。处于风险的人们以及患有复发性癌症的患者应被全面监控。另外，由于肿瘤可能对不同疗法有不同响应，因此患者的分级变得很重要。

使用肿瘤活检的遗传分析已经允许识别对癌症诊断以及显现患者分级策略有用的很多突变。但是，目前肿瘤遗传的弱点是对肿瘤活检的需要，而肿瘤活检常常是不可能从患者中解剖的。另外，活检的使用是静态的，且不允许随着时间对肿瘤的进展或复发进行遗传监控。此外，很多肿瘤是不均匀的，而导致这样的肿瘤活检出现潜在的假阳性或假阴性的遗传特征。

最近，循环的肿瘤细胞用于肿瘤进展或复发的诊断和监控的应用示出血液作为肿瘤来源的材料、特别是以细胞形式的组织碎片的来源的应用。但是循环的肿瘤细胞的应用对大部分癌症是无效的。

Calverley等（Clinical and Translational Science卷3,第5期,2010）公开了在转移的肺癌中血小板的基因表达的下调。作者识别出200个基因显示出在健康人和患者之间的差异表达。据作者所称，血小板的蛋白质组被反映在血小板的转录物组中。如被测量的基因表达与来自巨核细胞的基因相关联。但并没有公开当测试凝血细胞时测量了来源于除巨核细胞之外的其它细胞的RNA/DNA，且没有示出来源于其它细胞的循环的RNA/DNA可以被凝血细胞摄入。

通常，疾病标记物被定义为如下的化合物：当与正常的健康受试者相比时，所述化合物的浓度在来自患病患者的生物流体中被改变，优选升高，且所述化合物随后被用作指示疾病的标记物化合物。但是，由于缺少合适的技术已经妨碍了特异化合物、例如蛋白质在各种体液中作为疾病（诸如癌症）标记物的识别。

在除了癌症之外的其它疾病的情况中，也可获得难以检测到的标记物。这妨碍了疾病的早期诊断。

Lood等（Blood卷116,第11期,2010）公开了在患有SLE的患者的血小板中IFN-I调节的基因的基因表达升高。作者猜测IFNα影响巨核细胞中的基因表达，导致血小板中IFN-I调节的蛋白的水平升高。因此，来自巨核细胞的基因表达与SLE或血管疾病相关。但并没有公开来自患病细胞的RNA/DNA可以被血小板摄入。