[发明专利]用于蛋白纯化的缓冲液体系

权利要求书

1.通过一系列色谱步骤来纯化蛋白的多组分缓冲液体系，其中色谱模式选自亲和色谱、阴离子交换色谱，阳离子交换色谱和混合模式色谱，其中所述色谱模式在结合洗脱模式下或者在流通模式下操作，其中所述多组分缓冲液体系包含有机酸、该有机酸的共轭碱的碱金属盐或铵盐以及有机碱，并且其中使用不添加NaCl的缓冲液进行所述色谱模式。

2.权利要求1所述的体系，其中使用固定在固相上的超抗原来进行所述亲和色谱。

3.权利要求2所述的体系，其中超抗原选自蛋白A、蛋白G和蛋白L。

4.上述权利要求中任一项所述的体系，其中所述有机酸选自甲酸、乙酸、乳酸、柠檬酸、苹果酸、马来酸、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、琥珀酸、TES(2-{[三(羟甲基)甲基]氨基}乙磺酸)、MOPS(3-(N-吗啉代)丙磺酸)、PIPES(哌嗪-N,N′-双(2-乙磺酸))以及MES(2-(N-吗啉代)乙磺酸)。

5.上述权利要求中任一项所述的体系，其中所述有机碱选自Tris碱、Bis-Tris、Bis-Tris-丙烷、Bicine(N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸)、HEPES(4-2-羟乙基-1-哌嗪乙磺酸)、TAPS(3-{[三(羟甲基)甲基]氨基}丙磺酸)以及Tricine(N-三(羟甲基)甲基甘氨酸)。

6.上述权利要求中任一项所述的体系，其中所述有机酸的共轭碱为该有机酸的共轭碱的钠盐、钾盐或铵盐。

7.上述权利要求中任一项所述的体系，其中所述有机酸为醋酸。

8.上述权利要求中任一项所述的体系，其中所述有机碱为Tris碱。

9.上述权利要求中任一项所述的体系，其中所述有机酸为醋酸以及所述有机酸的共轭碱为钠盐。

10.上述权利要求中任一项所述的体系，其中所述蛋白为抗原结合蛋白。

11.权利要求10所述的体系，其中所述抗原结合蛋白为IgG类的抗体。

12.权利要求10所述的体系，其中所述抗原结合蛋白为免疫球蛋白单一可变域。

13.上述权利要求中任一项所述的体系，其中所述色谱步骤的顺序包括蛋白A色谱和流通阴离子交换色谱。

14.上述权利要求中任一项所述的体系，其中所述色谱步骤的顺序包括蛋白A色谱、流通阴离子交换色谱和阳离子交换色谱。

15.上述权利要求中任一项所述的体系，其中所述色谱步骤的顺序包括在pH约为7.5的55mM Tris碱、45mM醋酸的存在下进行的蛋白A色谱。

16.上述权利要求中任一项所述的体系，其中所述色谱步骤的顺序包括在pH约为7.5的55mM Tris碱、45mM醋酸的存在下进行的流通阴离子交换色谱。

17.上述权利要求中任一项所述的体系，其中所述色谱步骤的顺序包括在pH约为5.0的25mM醋酸钠、12.1mM醋酸的存在下进行的阳离子交换色谱。

18.通过蛋白A色谱法从受污染的溶液中纯化蛋白的方法，其包括：(a)用含55mM Tris碱和45mM醋酸的pH约为7.5的蛋白A平衡缓冲液平衡固定在固相上的蛋白A；(b)从受污染的溶液中吸附蛋白至固定在固相上的蛋白A；(c)通过用含55mM Tris碱、45mM醋酸和300mM醋酸钠的pH约为7.5的第一蛋白A冲洗缓冲液冲洗固相来去除污染物；以及(d)用含1.8mM醋酸钠和28.2mM醋酸的pH约为3.6的蛋白A洗脱缓冲液从固相上回收蛋白，其中所有的缓冲液都不添加NaCl。

19.权利要求18所述的方法，进一步包括在步骤(c)之后并且在步骤(d)之前的以下步骤：通过用含55mM Tris碱和45mM醋酸的pH约为7.5的第二蛋白A冲洗缓冲液冲洗固相以去除污染物，其中所述第二蛋白A冲洗缓冲液不添加NaCl。

20.权利要求18或19所述的方法，进一步包括在步骤(d)之后的以下步骤：(e)用30mM醋酸、100mM HCl将含有回收蛋白的溶液滴定至pH约3.0;(f)使步骤(e)的溶液在约3.0的pH值维持约30至约60分钟；和(g)用约1M Tris将步骤(f)的溶液的pH调节至约7.5。