[发明专利]在细胞环境中于单分子水平上分析蛋白-蛋白相互作用的方法，和测定在细胞溶质中激活的蛋白密度的方法

权利要求书

1.一种在单分子水平上分析第一蛋白和第二蛋白之间的相互作用的方法，包括：

（a）准备至少两个基片，其中，在每个基片上结合有第一蛋白结合分子，所述第一蛋白结合分子为将要与第一蛋白结合的生物分子；

（b）分别在第一基片和第二基片上诱导所述第一蛋白和所述第一蛋白结合分子之间的结合，包括将对照组细胞所包含的第一蛋白提供给所述两个基片中的第一基片，而将所述实验组细胞所包含的第一蛋白提供给所述两个基片中的第二基片；

（c）当所述第一蛋白和所述第一蛋白结合分子分别与所述第一基片和所述第二基片结合时，将包含标记物标记的第二蛋白的细胞的细胞溶胞产物分别提供给所述第一基片和所述第二基片；和

（d）将所述细胞溶胞产物分别提供给所述第一基片和所述第二基片后，比较和分析在所述第一基片和所述第二基片上第一蛋白和第二蛋白之间的相互作用。

2.如权利要求1所述的方法，其中，在步骤（b）中，所述对照组细胞是正常细胞，而所述实验组细胞是肿瘤细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其中，所述步骤（d）包括使用产生近场的光学设备测量由标记与第一蛋白结合的第二蛋白的标记物所产生的具有特定波长的荧光信号。

4.如权利要求3所述的方法，其中，在步骤（d）中，所述具有特定波长的荧光信号是在预定时间期间内累加测量的。

5.如权利要求3所述的方法，其中，在步骤（d）中，所述具有特定波长的荧光信号是在提供给所述基片的所述细胞溶胞产物存在的条件下实时测量的。

6.如权利要求1所述的方法，其中，所述步骤（b）包括将对照组细胞的细胞溶胞产物提供给所述第一基片，并且将实验组细胞的细胞溶胞产物提供给所述第二基片。

7.如权利要求1所述的方法，还包括在步骤（c）之前将缓冲液提供给所述基片。

8.一种测定细胞溶胞产物中活化蛋白浓度的方法，包括：

（a）准备一个结合有第一蛋白结合分子的基片，所述的第一蛋白结合分子为准备与第一蛋白结合的生物分子；

（b）通过将包含第一蛋白的细胞溶胞产物提供给所述基片，诱导所述第一蛋白和所述第一蛋白结合分子的结合；

（c）当所述第一蛋白与所述基片上的第一蛋白结合分子结合时，提供包含标记物标记的第二蛋白的细胞溶胞产物；和

（d）分析所述基片上所述第一蛋白和所述第二蛋白之间的相互作用。

9.如权利要求8所述的方法，还包括（e）重复步骤（b）-（d），包括在所述步骤（b）中按预定的比例提高包含第一蛋白的细胞溶胞产物的浓度。

10.如权利要求9所述的方法，其中，步骤（d）包括在所述基片上任何成形的观察区域测量由标记与所述第一蛋白结合的第二蛋白的标记物所产生的具有特定波长的荧光信号的生成频率。

11.如权利要求8所述的方法，其中，在步骤（d）中与所述第二蛋白相互作用的第一蛋白，是与第一蛋白结合分子结合的第一蛋白中被激活的第一蛋白。

12.如权利要求8所述的方法，其中，步骤（d）包括使用生成近场的光学设备测量由标记与所述第一蛋白结合的第二蛋白的标记物所产生的具有特定波长的荧光信号。

13.一种测定细胞溶胞产物中活化蛋白浓度的方法，包括：

（a）准备至少两个基片，第一蛋白结合分子分别与这些基片结合，所述第一蛋白结合分子为将要与第一蛋白结合的生物分子；

（b）分别在第一基片和第二基片上诱导第一蛋白和第一蛋白结合分子之间的结合，包括将对照组细胞所包含的所述第一蛋白提供给所述两个基片中的第一基片，并且将实验组细胞所包含的第一蛋白提供给所述两个基片中的第二基片；

（c）当所述第一蛋白和所述第一蛋白结合分子分别与所述第一基片和所述第二基片结合时，将包含标记物标记的第二蛋白的细胞溶胞产物分别提供给所述第一基片和所述第二基片；和

（d）将所述细胞溶胞产物分别提供给所述第一基片和所述第二基片后，比较和分析在所述第一基片和所述第二基片上第一蛋白和第二蛋白之间的相互作用。

14.如权利要求13所述的方法，还包括（e）重复步骤（b）-（d），同时，在所述步骤（b）中，按预定的比例提高所述对照组细胞溶胞产物和所述实验组-细胞溶胞产物的浓度。