[发明专利]用于大肠杆菌中异源蛋白质生产的新的表达和分泌载体系统

权利要求书

1.一种重组宿主细胞，包含表达载体和可选的辅助质粒，其中，所述重组细胞是膜缺陷型细胞。

2.根据权利要求1所述的表达载体，所述表达载体能够引导在适合的宿主细胞中蛋白质、多肽或肽的表达和分泌，其中，所述表达载体还包含分泌性信号序列、可诱导启动子和目标基因。

3.根据权利要求1所述的辅助质粒，所述辅助质粒共表达属于SEC、TAT、SRP输出途径或它们的组合的转位子。

4.根据权利要求2所述的表达载体，其中，目标基因包括原核基因和真核基因。

5.根据权利要求2所述的表达载体，其中，所述分泌性信号序列选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9。

6.根据权利要求2所述的表达载体，所述表达载体在宿主细胞中使用，其中所述宿主细胞是原核生物。

7.根据权利要求6所述的分离的宿主细胞，其中，所述宿主细胞是大肠杆菌或其菌株。

8.根据权利要求2所述的表达载体，所述表达载体包含至少一种质粒，所述质粒选自pAEV01、pAEV02、pAEV03、pAEV04、pAEV05、pAEV06或pAEV07。

9.一种获得重组细胞的方法，所述方法包括以下步骤：

a）获得重组载体；

b）用所述重组载体转化宿主细胞；和

c）可选地用辅助质粒共转化所述宿主细胞以获得所述重组细胞。

10.一种获得重组肽的方法，所述方法包括以下步骤：

a）获得包含分泌性信号序列、可诱导启动子和目标基因的重组载体；

b）用所述重组载体转化宿主细胞，并且可选地用辅助质粒共转化所述宿主细胞；

c）表达所述重组载体并使所述重组肽分泌到胞外培养基中；和

d）可选地纯化所述重组肽。

11.根据权利要求9和10中所述的辅助质粒，所述辅助质粒共表达属于SEC、TAT、SRP输出途径或它们的组合的转位子。

12.根据权利要求9和10所述的方法，其中，表达载体包含至少一种质粒，所述质粒选自pAEV01、pAEV02、pAEV03、pAEV04、pAEV05、pAEV06或pAEV07。

13.根据权利要求9和10所述的方法，其中，所述表达载体包含密码子优化的分泌性信号序列，所述分泌性信号序列选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9。

14.根据权利要求10所述的方法，其中，所述可诱导启动子是T5启动子。

15.根据权利要求7所述的宿主细胞，所述宿主细胞具有缺陷外膜，进一步用信号肽-重组蛋白融合载体和转位子编码质粒共转化所述宿主细胞。

16.一种用于获得重组肽的试剂盒，所述试剂盒包含表达载体、重组细胞或其组合。