[发明专利]目标粒子的检测方法

权利要求书

1.一种目标粒子的检测方法，

其为检测在试样溶液中分散并随机运动的粒子的方法，具有：

(a)将被检试样浓缩以提高所述被检试样中的目标粒子的浓度的工序；(b)调制包含所述工序(a)中被浓缩的被检试样和用以与所述目标粒子结合的发光探针的试样溶液，使所述目标粒子与所述发光探针在所述试样溶液中结合的工序；和

(c)计数所述工序(b)中调制的试样溶液中存在的、与发光探针结合的目标粒子的个数的工序；

在所述发光探针与所述目标粒子结合的状态下、与所述发光探针单独存在的状态下发出的光的发光特性不同，

所述工序(c)中的与发光探针结合的目标粒子的个数的计数通过如下工序进行：

使用共聚焦显微镜或多光子显微镜的光学系统，在所述试样溶液内移动所述光学系统的光检测区域的位置的工序；

一边在所述试样溶液内移动所述光学系统的光检测区域的位置，一边检测由所述光检测区域中的与所述目标粒子结合状态的所述发光探针发出的光信号，逐个检测与发光探针结合的目标粒子的工序；和

将所述逐个检测的与发光探针结合的目标粒子的个数进行计数而计数所述光检测区域的位置的移动中检测到的所述目标粒子的个数的工序。

2.根据权利要求1所述的目标粒子的检测方法，其中，所述工序(c)中的试样溶液中的目标粒子的数密度是相对于所述光检测区域的体积Vd为1分子以下。

3.根据权利要求1或2所述的目标粒子的检测方法，其中，所述目标粒子为核酸，所述工序(a)为从所述被检试样中精制核酸、进行浓缩的工序。

4.根据权利要求1或2所述的目标粒子的检测方法，其中，所述工序(a)为从所述被检试样中特异地回收目标粒子、进行浓缩的工序。

5.根据权利要求1～4的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，在所述移动光检测区域的位置的工序中，所述光检测区域的位置以规定的速度移动。

6.根据权利要求1～5的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，在所述移动光检测区域的位置的工序中，以比所述与发光探针结合的目标粒子的扩散移动速度更快的速度移动所述光检测区域的位置。

7.根据权利要求1～6的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，在由所述检测到的光检测来自每个与发光探针结合的目标粒子的光信号而逐个检测所述与发光探针结合的目标粒子的工序中，根据检测到的按照时间顺序的光信号的形状，检测到一个与发光探针结合的目标粒子进入了所述光检测区域。

8.根据权利要求1～7的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，

所述发光探针具有相互接近时产生荧光共振能量转移现象的能量供体部位和能量受体部位，并且，在所述发光探针与所述粒子结合的状态以及所述发光探针不与所述粒子结合的状态之间，所述能量供体部位与所述能量受体部位的距离不同；

在所述发光探针与所述目标粒子结合的状态下、与所述发光探针单独存在的状态下，由所述发光探针发出的光的发光特性不同。

9.根据权利要求1～8的任一项所述的目标粒子的检测方法，其中，所述目标粒子为核酸，

所述发光探针与所述目标粒子特异地杂交，并且所述发光探针为单链核酸，该单链核酸上结合有荧光共振能量转移现象中的成为能量供体的荧光物质以及成为能量受体的物质的至少一者。

10.一种目标粒子的检测方法，

其为检测在试样溶液中分散并随机运动的粒子的方法，具有：

(a’)调制包含被检试样、和用以与目标粒子结合的发光探针的试样溶液的工序；

(b’)使所述目标粒子与所述发光探针在所述工序(a’)中调制的试样溶液中结合的工序；和

(c’)计数所述工序(b’)中调制的试样溶液中存在的、与发光探针结合的目标粒子的个数的工序；

所述发光探针在与所述目标粒子结合的状态下以及单独存在的状态下发出的光的发光特性不同；

所述工序(c’)中的与发光探针结合的目标粒子的个数的计数通过如下工序进行：

使用共聚焦显微镜或多光子显微镜的光学系统，在所述试样溶液内移动所述光学系统的光检测区域的位置的工序；

一边在所述试样溶液内移动所述光学系统的光检测区域的位置，一边检测由所述光检测区域中的与所述目标粒子结合状态的所述发光探针发出的光信号，逐个检测与发光探针结合的目标粒子的工序；和

将所述逐个检测的与发光探针结合的目标粒子的个数进行计数而计数所述光检测区域的位置的移动中检测到的所述目标粒子的个数的工序；

在所述工序(a’)之后或所述工序(b’)之后进行浓缩处理以提高所述试样溶液中的目标粒子的浓度。