[发明专利]哺乳动物细胞培养

说明书

技术领域

本发明提供一种培养哺乳动物细胞的方法。所述方法对细胞生长提供较大控制以获得高产物滴度的细胞培养物。

发明背景

随着对越来越大量的治疗重组蛋白的需求增加，通过实施新方法改善细胞发育、培养基最优化和过程控制参数来寻求细胞生长、生存力和蛋白生产的正增加。现在对过程最优化、特别是生长、饲养和维持生产细胞培养物的方法和策略作出许多努力。

鉴于大规模细胞培养过程的费用和对生物产物的更大量和更低成本的增长需求，提供重组蛋白生产的甚至增量改善的新细胞培养方法是有价值的。

需要可以促成更高生产水平、从而降低与制造蛋白治疗剂相关的成本的细胞培养过程、重组多肽表达、滴度和细胞生存力有所改善。本发明通过提供简单、容易并且廉价的控制细胞生长同时增加蛋白生产的方法来满足这些需要。

发明概要

本发明提供一种阻滞在表达重组蛋白的哺乳动物细胞培养物中的细胞生长的方法，其包括在生物反应器中在无血清培养基中建立哺乳动物细胞培养物；通过用L-天冬酰胺浓度是5mM或更小的无血清灌注培养基灌注来诱导细胞生长阻滞；通过用L-天冬酰胺浓度是5mM或更小的无血清灌注培养基灌注来将所述哺乳动物细胞维持在生长受阻滞的状态。

本发明还提供一种增加在表达重组蛋白的哺乳动物细胞培养物中的重组蛋白生产的方法，其包括在生物反应器中在无血清培养基中建立哺乳动物细胞培养物；通过用L-天冬酰胺浓度是5mM或更小的无血清灌注培养基灌注来诱导细胞生长阻滞；通过用L-天冬酰胺浓度是5mM或更小的无血清灌注培养基灌注来将所述哺乳动物细胞维持在生长受阻滞的状态。在一相关实施方案中，该哺乳动物细胞培养物中的重组蛋白生产与所述细胞不经历L-天冬酰胺诱导的细胞生长阻滞的培养物相比有所增加。

本发明还提供一种将表达重组蛋白的哺乳动物细胞培养物限制在所需压积细胞体积下的方法，其包括在生物反应器中在无血清培养基中建立哺乳动物细胞培养物；通过用L-天冬酰胺浓度是5mM或更小的无血清灌注培养基灌注来诱导细胞生长阻滞；通过用L-天冬酰胺浓度是5mM或更小的无血清灌注培养基灌注来将所述哺乳动物细胞维持在生长受阻滞的状态。

在本发明的一个实施方案中，在任何以上方法中，该用L-天冬酰胺浓度是5mM或更小的无血清灌注培养基灌注开始于该培养的第3天时或之前。在另一实施方案中，在任何以上方法中，诱导细胞生长阻滞在生产期之前发生。在另一实施方案中，在任何以上方法中，诱导细胞生长阻滞在生产期期间发生。在另一实施方案中，在任何以上方法中，细胞生长阻滞通过L-天冬酰胺饥饿诱导。在另一实施方案中，任何以上方法进一步包括从36℃到31℃的温度变换。在另一实施方案中，任何以上方法进一步包括从36℃到33℃的温度变换。在一相关实施方案中，该温度变换在生长期与生产期之间过渡时发生。在另一实施方案中，该温度变换在生产期期间发生。在另一实施方案中，以上方法进一步包括在生产期期间小于或等于35％的压积细胞体积。在一相关实施方案中，在生产期期间的该压积细胞体积小于或等于35％。

本发明还提供一种培养表达重组蛋白的哺乳动物细胞的方法，其包括在生物反应器中在无血清培养基中建立哺乳动物细胞培养物；使所述哺乳动物细胞在生长期期间生长并且用无血清进料培养基的批式进料补充该培养基；和通过用无血清灌注培养基灌注来在生产期期间维持所述哺乳动物细胞，其中在该生产期期间的该压积细胞体积小于或等于35％。在本发明的一个实施方案中，灌注开始于该细胞培养的第5天时或大约第5天时至第9天时或大约第9天时。在一相关实施方案中，灌注开始于该细胞培养的第5天时或大约第5天时至第7天时或大约第7天时。在一个实施方案中，灌注开始于所述细胞已经达到生产期时。在另一实施方案中，该方法进一步包括通过L-天冬酰胺饥饿随后用L-天冬酰胺浓度是5mM或更小的无血清灌注培养基灌注来诱导细胞生长阻滞。在又一实施方案中，该方法进一步包括通过用L-天冬酰胺浓度是5mM或更小的无血清灌注培养基灌注来诱导细胞生长阻滞。