[发明专利]靶向间皮素的重组免疫毒素

权利要求书

1.一种嵌合分子，其包含具有式M-L1-FCS-FL-功能性PE域III的融合多肽，其中

M是特异性结合间皮素的抗体，或其特异性结合间皮素的片段；

L1由1至10个连续的氨基酸残基组成；

FCS是弗林蛋白酶切割位点，其由能够被弗林蛋白酶切割的连续氨基酸残基组成；

FL由3至8个连续的氨基酸残基组成，所述氨基酸残基独立选自甘氨酸和丝氨酸；

功能性PE域III由在序列上与SEQ ID NO:1从位置395至613相同的连续氨基酸残基组成，任选地，所述连续氨基酸残基包含(i)与SEQ ID NO:1的609-613对应的一个或多个残基的取代，(ii)甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、或异亮氨酸对与SEQ ID NO:1的位置490对应的位置处的精氨酸的取代，(iii)与SEQ ID NO:1的残基对应的一个或多个残基的取代，所述SEQ ID NO:1的残基维持PE域III的表位或亚表位的免疫原性，或(iv)(i)-(iii)中任一项的组合。

2.权利要求1的分子，其中所述抗体是微型抗体(minibody)、双抗体(diabody)、三抗体(triabody)、Fab’片段、F(ab)’₂片段、单链Fv蛋白(“scFv”)、或二硫化物稳定化的Fv蛋白(“dsFv”)片段。

3.权利要求1的分子，其中所述抗体片段包含经由重链与L1的连接与所述分子的剩余部分融合的二硫化物稳定化的轻链和重链免疫球蛋白可变区。

4.权利要求1的分子，其中所述抗体包含：

VH链，该VH链包含CDR1氨基酸序列GYTMN(SEQ ID NO:51)、CDR2氨基酸序列LITPYNGASSYNQKFRG(SEQ ID NO:52)、和CDR3氨基酸序列GGYDGRGFDY(SEQ ID NO:53)，和

V_L链，该VL链包含CDR1氨基酸序列SASSSVSYMH(SEQ ID NO:54)、CDR2氨基酸序列DTSKLAS(SEQ ID NO:55)、和选自下组的CDR3氨基酸序列：QQWSGYPLT(SEQ ID NO:56)，QQWSKHPLT(SEQ ID NO:57)，QQWSGHPLT(SEQ ID NO:58)，QQWSAHPLT(SEQ ID NO:59)，QQWSQIPLT(SEQ ID NO:60)，QQWGFNPLT(SEQ ID NO:61)，QQWGTNPLT(SEQ ID NO:62)，QQWGSHPLT(SEQ ID NO:63)，QQWGDFPLT(SEQ ID NO:64)，QQWGDHPLT(SEQ ID NO:65)，QQWSAHPLT(SEQ ID NO:66)，和QQWSGYPTT(SEQ ID NO:67)。

5.权利要求4的分子，其中所述V_L CDR3氨基酸序列是QQWSKHPLT(SEQ ID NO:57)。

6.权利要求1的分子，其中L1的长度是3至5个氨基酸。

7.权利要求1的分子，其中L1是ASGG(SEQ ID NO:19)。

8.权利要求1的分子，其中所述PE域III具有丙氨酸、甘氨酸或丝氨酸对至少一个与SEQ ID NO:1中选自下组的氨基酸残基对应的氨基酸残基的取代：D403，R412，R427，E431，R458，D461，R505，E522，R538，R551，R576和L597。

9.权利要求1的分子，其中所述PE域III具有丙氨酸、甘氨酸或丝氨酸对至少一个与SEQ ID NO:1中选自下组的氨基酸残基对应的氨基酸残基的取代：D406，R432，R467，R490，R513，E548，K590和Q592。

10.权利要求1的分子，其中所述FL是GGS，(GGS)₂(SEQ ID NO:18)，GSGG(SEQ ID NO:71)，GGSGG(SEQ ID NO:72)，GGSG(SEQ ID NO:73)，GSG，或GGG。

11.权利要求1的分子，其中FL是GGS。

12.权利要求1的分子，其中所述弗林蛋白酶切割序列是RHRQPRGWEQL(SEQ ID NO:17)。