[发明专利]靶向间皮素的重组免疫毒素

说明书

对相关申请的交叉引用

本申请要求2011年5月6日提交的美国临时专利申请系列号61/483531的优先权权益，并且其通过全文提述并入本文。

关于在联邦资助的研究和开发下得到的发明的权利的声明不适用。

参考光盘上提交的“序列表”、表或计算机程序表附录不适用。

发明背景

重组免疫毒素(RIT)是组合抗体片段与源自细菌或植物来源的细胞毒性蛋白的工程化治疗性蛋白质。RIT设计成选择剂，用于在没有多种与化学治疗策略有关的继发毒性的情况下靶向消除细胞。用于治疗癌症的RIT可以通过融合针对肿瘤关联细胞表面抗原的抗体的可变片段(Fv)与假单胞菌(Pseudomonas)外毒素A(PE)的片段来构建。使用假单胞菌外毒素A的38-kDa截短(PE38)得到的RIT已经在临床试验中获得值得注意的成功，但是具有限制，其包括较差的实体瘤穿透、高免疫原性、和非特异性毒性(Kreitman RJ等,Clin Cancer Res.,15(16):5274-9(2009;Hassan R等,Clin Cancer Res.,13(17):5144-9(2007);Wayne AS等,Clin Cancer Res.,16(6):1894-903(2010);Kreitman RJ等,J Clin Oncol.,27(18):2983-90(2009);Sampson JH等,Neuro Oncol.,10(3):320-9(2008);Powell DJ Jr等,J lmmunol.,179(7):4919-28(2007);Kreitman RJ,J Clin Oncol.,23(27):6719-29(2005);Pal LH等,Nat Med.,2(3):350-3(1996))。

为了改善用RIT治疗的结果，PE中毒途径的知识对于了解这些蛋白质的设计是重要的。RIT经由受体介导的胞吞及通过内溶酶体系统运输到高尔基(Golgi)(在那里，它们经历逆向转运至内质网(ER))被内在化。在此运输阶段期间，毒素经由二硫键的还原及PE38中某个位点处蛋白酶弗林蛋白酶的切割(其分开Fv与PE片段)而活化。随后，活化的PE必须移位到胞质溶胶中，在那里，它进行ADP核糖基化并且使延长因子2(一种翻译装置必需的组分)失活。这使蛋白质合成停止，并且最终导致细胞死亡(关于PE中毒途径的综述，参见9)。先前设计为改善基于PE的RIT的细胞毒性活性的策略包括用规范的ER保留信号KDEL(SEQ ID NO:16)取代PE的C端残基REDLK(SEQ ID NO:15)(见tharam S等,J Biol Chem.,266(26):17376-81(1991);Du X,Ho M,and Pastan I,J lmmunother.,30(6):607-13(2007);Rozemuller H.等,Int J Cancer.,92(6):861-70(2001);Kreitman RJ and Pastan I.,Biochem J.,307(Pt1):29-37(1995))。已知此变化增强PE的细胞毒性，据推测其通过改善从高尔基逆向转运到ER的效率实现。此策略是有效的，但是通常也增强RIT的非特异性毒性。另一种策略是通过改善Fv与其靶物之间的亲和力来增强RIT受体复合物的有效的内在化，并且由此增加细胞中的毒素量(Salvatore G等,Chn Cancer Res.,8(4):995-1002(2002);Decker T等,Blood.,103(7):2718-26(2004))。