[发明专利]在植物中产生狂犬病病毒样颗粒

权利要求书

1.在植物中产生狂犬病病毒样颗粒(VLP)的方法，其包括：

a)将包含调节区的核酸引入到所述植物或所述植物的一部分中，所述调节区在所述植物中有活性并且与编码一种或更多种天然狂犬病糖蛋白G的核苷酸序列可操作地相连接，所述核苷酸序列还编码、包含或者既编码又包含一种或多于一种扩增元件，所述扩增元件包含双粒病毒组基因组的一种或更多种长基因间区或者长基因间隔重复，

b)在允许表达所述核酸的条件下孵育所述植物或所述植物的一部分，从而产生所述狂犬病VLP，

c)收获所述植物，以及

d)提取所述VLP，其中所述VLP的大小为40至300nm。

2.在植物中产生狂犬病病毒样颗粒(VLP)的方法，其包括：

a)提供植物或所述植物的一部分，其包含含有调节区的核酸，所述调节区在所述植物中有活性并且与编码一种或更多种天然狂犬病糖蛋白G的核苷酸序列可操作地相连接，所述核苷酸序列还编码、包含或者既编码又包含一种或多于一种扩增元件，所述扩增元件包含双粒病毒组基因组的一种或更多种长基因间区或者长基因间隔重复，

b)在允许表达所述核酸的条件下孵育所述植物或所述植物的一部分，从而产生所述狂犬病VLP，

c)收获所述植物，以及

d)提取所述VLP，其中所述VLP的大小为40至300nm。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多于一种扩增元件来自菜豆黄矮病毒。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述一种或多于一种扩增元件来自菜豆黄矮病毒。

5.根据权利要求1所述的方法，其中将包含第二调节区的第二核酸引入到所述植物或所述植物的一部分中，并且当在步骤b)中孵育所述植物或所述植物的一部分时表达所述第二核酸，所述第二调节区在所述植物中有活性并且与编码狂犬病基质蛋白M或其片段的第二核苷酸序列可操作地相连接。

6.根据权利要求2所述的方法，其中所述植物或所述植物的一部分还包含含有第二调节区的第二核酸，并且当在步骤b)中孵育所述植物或所述植物的一部分时表达所述第二核酸，所述第二调节区在所述植物中有活性并且与编码狂犬病基质蛋白M或其片段的第二核苷酸序列可操作地相连接。

7.根据权利要求1所述的方法，其中在所述孵育步骤即步骤b中，所述核酸在所述植物中瞬时表达。

8.根据权利要求1所述的方法，其中在所述孵育步骤即步骤b中，所述核酸在所述植物中稳定表达。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述VLP通过生物化学提取进行提取。

10.植物来源的VLP，其由根据权利要求1至9中任一项所述的方法产生，其中所述VLP的大小为40至300nm。

11.根据权利要求10所述的VLP，其中一种或更多种糖蛋白G包含植物特异性N-聚糖或经修饰N-聚糖。

12.组合物，其包含用于在对象中诱导免疫应答的有效剂量的根据权利要求10至11中任一项所述之VLP和可药用载体。

13.根据权利要求12所述的组合物在制造用于在对象中诱导针对狂犬病病毒感染之免疫的疫苗中的用途。

14.根据权利要求13所述的用途，其中所述组合物配制成经口、皮内、鼻内、肌内、腹膜内、静脉内或皮下施用于对象。

15.根据权利要求10-11中任一项所述的VLP，其用于在对象中诱导针对狂犬病病毒感染的免疫。

16.食物补充剂，其包含根据权利要求10至11中任一项所述的VLP。

17.根据权利要求1或5所述的方法，其还包括引入另外的核酸序列，所述另外的核酸序列编码沉默抑制子、双粒病毒组复制酶或二者。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述沉默抑制子和所述双粒病毒组复制酶由引入到所述植物或所述植物的一部分中的两种不同的另外的核酸序列编码。

19.根据权利要求17所述的方法，其中所述沉默抑制子选自HcPro和p19。