[发明专利]重组蛋白通过与PNGaseF共表达在活体内去糖基化

权利要求书

1.一种用于生成所关注的去糖基化多肽的方法，其包含产生包含以下各项的植物细胞：

(a)第一核酸，其包含编码细菌性PNGase F多肽的第一核苷酸序列，所述PNGase F多肽具有SEQ ID NO:2中所阐述的氨基酸序列，其中所述第一核苷酸序列可操作地连接到启动子，以便当所述启动子被激活时，表达所述PNGase F多肽；和

(b)第二核酸，其包含编码所述所关注多肽的第二核苷酸序列，其中所述第二核苷酸序列可操作地连接到启动子，以便当所述启动子被激活时，表达所述所关注的多肽，

其中通过所述PNGase F多肽的作用，使所述所关注的多肽在所述植物细胞中去糖基化。

2.根据权利要求1所述的方法，其包含将所述第一和第二核酸同时引入到所述细胞中。

3.根据权利要求1所述的方法，其包含将所述第一和第二核酸分别引入到所述细胞中。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一和第二核酸存在于同一核酸构筑物中。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述植物细胞是本塞姆氏烟草(Nicotiana benthamiana)细胞。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一核苷酸序列具有SEQ ID NO:1中所阐述的序列。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一核苷酸序列包括编码以下的核苷酸序列：

烟草PR-1a信号肽，其具有SEQ ID NO:3中所阐述的序列；

FLAG表位亲和力纯化标签，其具有SEQ ID NO:4中所阐述的序列；和

ER驻留信号，其具有SEQ ID NO:5中所阐述的序列。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一和第二核酸是经由土壤杆菌(Agrobacterium)构筑物引入到所述细胞中。

9.一种植物细胞，其包含：

(a)第一核酸，其包含编码细菌性PNGase F多肽的第一核苷酸序列，所述PNGase F多肽具有SEQ ID NO:2中所阐述的氨基酸序列，其中所述第一核苷酸序列可操作地连接到启动子，以便当所述启动子被激活时，表达所述PNGase F多肽；和

(b)第二核酸，其包含编码所关注多肽的第二核苷酸序列，其中所述第二核苷酸序列可操作地连接到启动子，以便当所述启动子被激活时，表达所述所关注的多肽，以及通过所述PNGase F多肽的作用，使所述所关注的多肽在所述植物细胞中去糖基化，

其中所述植物细胞不生长成植物。

10.根据权利要求9所述的植物细胞，其中所述植物细胞是本塞姆氏烟草细胞。

11.根据权利要求9所述的植物细胞，其中所述第一核苷酸序列具有SEQ ID NO:1中所阐述的序列。

12.根据权利要求9所述的植物细胞，其中所述第一核苷酸序列包括编码以下的核苷酸序列：

烟草PR-1a信号肽，其具有SEQ ID NO:3中所阐述的序列；

FLAG表位亲和力纯化标签，其具有SEQ ID NO:4中所阐述的序列；和

ER驻留信号，其具有SEQ ID NO:5中所阐述的序列。

13.一种表达系统，其包含：

(a)第一核酸，其包含编码细菌性PNGase F多肽的第一核苷酸序列，所述PNGase F多肽具有SEQ ID NO:2中所阐述的氨基酸序列，其中所述第一核苷酸序列可操作地连接到启动子，以便当将所述第一核酸引入到植物细胞中且所述启动子被激活时，表达所述PNGase F多肽；和

(b)第二核酸，其包含编码所关注多肽的第二核苷酸序列，其中所述第二核苷酸序列可操作地连接到启动子，以便当将所述第二核酸引入到所述植物细胞中且所述启动子被激活时，表达所述所关注的多肽，以及通过所述PNGase F多肽的作用，使所述所关注的多肽在所述植物细胞中去糖基化。

14.根据权利要求13所述的表达系统，其中所述第一核苷酸序列具有SEQ ID NO:1中所阐述的序列。