[发明专利]具有脂肪酸链延长促进活性的蛋白质、编码该蛋白质的基因及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及具有脂肪酸链延长促进活性的新型蛋白质、编码该蛋白质的多核苷酸及其利用方法。

背景技术

在酵母等的微生物中，脂肪酸的链延长反应经过（i）脂酰-CoA与丙二酰-CoA的缩合反应、（ii）作为缩合生成物的3-氧酰基-CoA的还原反应、（iii）3‐羟酰-CoA的脱水反应、（iv）反式-2-烯酰-CoA的还原反应的四步反应，碳原子数每次增加2个，碳链得到延长（非专利文献1）。

已知上述（i）～（iv）的反应中分别为（i）3-酮脂酰-CoA合成酶、（ii）β-酮脂酰还原酶、（iii）3-羟酰-CoA脱氢酶、（iv）烯酰-CoA还原酶的酶起媒介作用（非专利文献1）。

已知这些酶中，负责缩合反应的3-酮脂酰-CoA合成酶对作为底物的脂肪酸显示特异性，从各种生物中克隆了具有各种特异性的酶。

特别是已明确了在真菌类中的最经常研究的酵母中，脂肪酸链延长反应的全部四步反应中负责各反应的酶及编码该酶的基因。

例如，在酵母中，作为编码负责β-酮脂酰还原酶活性的酶的基因，已知有IFA38和AYR1的2个，且还已知同时缺失这2个基因时会致死（非专利文献2）。此外，还已知AYR1基因具有1-酰基二羟基丙酮磷酸还原酶活性。（非专利文献3）

另一方面，作为编码负责3-羟酰-CoA脱氢酶活性的酶的基因，已知有PHS1（必需），作为编码负责烯酰-CoA还原酶活性的酶的基因，已报道了TSC13（必需）。

相对于此，在作为脂质生产菌的高山被孢霉（Mortierella alpina(M.alpina)）中，已知有承担与脂肪酸链延长有关的最初的反应的3-酮脂酰-CoA合成酶（所谓的链延长酶）基因（MALCE1（ELO3）、MALCE2、GLELO、MAELO）（专利文献1），但3-酮脂酰-CoA合成酶以外的酶的基因还不为人所知。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:国际公开公报WO2010/147138号

非专利文献

非专利文献1:Kihara A.,et al.,(2008)J.Biol.Chem.283,11199-11209

非专利文献2:Han,G.et al.,(2002)J.Biol.Chem.277,35440-35449

非专利文献3:Athenstaedt,K.,and Daum,G.(2000)J.Biol.Chem.275,235-240

发明内容

在如上所述的状况下，希望得到与高山被孢霉（M.alpina）细胞内的脂肪酸链延长反应有关的新型蛋白质或编码该蛋白质的基因。

本发明者不断深入研究的结果，成功地克隆了编码作为酵母的3-羟酰-CoA脱氢酶的AYR1的同源蛋白质MaADR1的基因，从而完成了本发明。即本发明提供以下的多核苷酸、蛋白质、表达载体、转化体、使用该转化体的脂质或脂肪酸组合物及食品等的制造方法以及通过此种制法制造的食品等。

具体地说，本发明如下。

［1］一种多核苷酸，其特征在于，选自以下（a）～（e）中的任一项所述的多核苷酸:

（a）多核苷酸，含有序列号1或4的碱基序列；

（b）多核苷酸，编码由序列号2的氨基酸序列组成的蛋白质；

（c）多核苷酸，其编码由序列号2的氨基酸序列中1～100个氨基酸发生缺失、取代、插入及／或附加的氨基酸序列组成且具有脂肪酸链延长促进活性的蛋白质；

（d）多核苷酸，其编码具有与序列号2的氨基酸序列有60%以上同一性的氨基酸序列且具有脂肪酸链延长促进活性的蛋白质；及

（e）多核苷酸，其与由序列号1或4的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交，编码具有脂肪酸链延长促进活性的蛋白质。

［2］根据上述［1］中所述的多核苷酸，其特征在于，为以下（f）或（g）中的任一项:

（f）多核苷酸，其编码由序列号2的氨基酸序列中1～10个氨基酸发生缺失、取代、插入及／或附加的氨基酸序列组成且具有脂肪酸链延长促进活性的蛋白质；及

（g）多核苷酸，编码具有与序列号2的氨基酸序列有75%以上同一性的氨基酸序列且具有脂肪酸链延长促进活性的蛋白质。

［3］根据上述［1］中所述的多核苷酸，其特征在于，含有序列号1或4的碱基序列。