[发明专利]用于合成卟啉‑磷脂结合物的方法

说明书

技术领域

本发明的领域涉及用于合成和提纯卟啉-磷脂结合物(porphyrin-phospholipid conjugate)的方法，且更具体地涉及具有限定的异构体纯度的卟啉-磷脂结合物组合物的合成和提纯。该卟啉-磷脂结合物组合物特别适合用来形成纳米囊泡。

背景技术

近来，在WO11/044671中描述了卟啉体(Porphysome)；是由卟啉-磷脂结合物形成的纳米囊泡，其是具有固有多模态的用于生物光子成像和治疗的生物相容的纳米颗粒。1修饰的磷脂已被证实可用于不同的生物技术应用，包括核酸递送(阳离子脂质)、诊断成像(放射性同位素-螯合脂质)、生物现象研究(荧光脂质)、以及药代动力学调制(PEG化脂质)和结构(可聚合脂质)。^2-4磷脂可在其首基(head group)或侧链上的各个位置被标记。5使用磷脂酰乙醇胺的伯氨基团可以容易地实现首基修饰。侧链修饰不太容易，但在保持磷脂两性分子特性的同时，适合用于结合更疏水的配体。近年来，用胆固醇、视黄酸和卟啉侧链修饰的磷脂已被研发，其具有用于给药、免疫学和生物光子应用的有用性能。^1，6-9

单侧链修饰的磷脂的合成通常受酰基转移的影响。所得的结构异构体(参见图1A)有相似的结构，这使得使用如HPLC、NMR和质谱技术使它们无法分离且使它们的检测很难或不可能。¹⁰结构选择性磷脂侧链修饰已使用多种技术实现。修饰的磷脂的合成已使用修饰的甘油基骨架以多步反应进行，有时需要保护基。^6，9，11根据方法和催化剂，溶血磷脂与脂肪酸酰氯、咪唑、酸酐和硫代吡啶酯的酰化作用已经实现了不同的异构体纯度(70％至99％)和产率(40％至90％)。^12，13然而，这些反应中间体的产生可引起降解反应且可能无法产生满意的产率和异构体纯度。羧酸用标准的偶联剂对溶血磷脂的直接酰化是方便的合成路线，且已报道了旨在减少酰基转移如用玻璃珠声波处理(sonication)的实验方案。¹⁴

发明内容

一方面，提供了包括卟啉-磷脂结合物双层的纳米囊泡，其中，每个卟啉-磷脂结合物包括共价连接到脂质侧链的一个卟啉、卟啉衍生物或卟啉类似物，该脂质侧链位于一个磷脂的sn-1或sn-2位中的一个，该纳米囊泡具有限定的sn-1∶sn-2卟啉-磷脂结合物的结构异构体比率(regioisomeric ratio)。

另一方面，提供了卟啉-磷脂结合物的组合物，其中，卟啉-磷脂结合物包括共价连接到脂质侧链的一个卟啉、卟啉衍生物或卟啉类似物，该脂质侧链位于一个磷脂的sn-1或sn-2位中的一个，其中该组合物有限定的sn-1∶sn-2卟啉-磷脂结合物的结构异构体比率。

另一方面，提供了由卟啉-磷脂结合物的sn-1和sn-2结构异构体的混合物生产卟啉-磷脂结合物的组合物的方法，每个所述结构异构体包括共价连接到脂质侧链的一个卟啉、卟啉衍生物或卟啉类似物，该脂质侧链位于一个磷脂的sn-1或sn-2位中的一个，其中该组合物具有限定的sn-1∶sn-2卟啉-磷脂结合物的结构异构体比率，该方法包括用酶温育结构异构体的混合物直到达到所限定的结构异构体比率，该酶选择性裂解sn-1或sn-2结构异构体中的一个。

根据另一方面，提供了用于从包含卟啉-磷脂结合物sn-1和sn-2结构异构体混合物的组合物中除去卟啉-磷脂结合物sn-1和sn-2结构异构体中的一个的方法，该方法包括酶催化裂解卟啉-磷脂结合物的sn-1和sn-2结构异构体中的一个。

另一方面，提供了用于由卟啉-磷脂结合物的sn-1和sn-2结构异构体的混合物生产卟啉-磷脂结合物的组合物的方法，每个所述结构异构体包括共价连接到脂质侧链的一个卟啉、卟啉衍生物或卟啉类似物，该脂质侧链位于一个磷脂的sn-1或sn-2位中的一个，其中该组合物具有限定的sn-1∶sn-2卟啉-磷脂结合物的结构异构体比率，该方法包括改变卟啉和磷脂结合反应的原料比。

另一方面，提供了用于由卟啉-磷脂结合物的sn-1和sn-2结构异构体的混合物生产卟啉-磷脂结合物的组合物的方法，每个所述结构异构体包括共价连接到脂质侧链的一个卟啉、卟啉衍生物或卟啉类似物，该脂质侧链位于一个磷脂的sn-1或sn-2位中的一个，其中该组合物具有限定的sn-1∶sn-2卟啉-磷脂结合物的结构异构体比率，该方法包括用有机萃取提纯该混合物并接着使用硅胶层析法提纯。