[发明专利]从山药分离出的新颖生物活性蛋白及其用途

说明书

对相关申请的交叉引用

本申请要求2011年8月17日提交的美国临时申请系列号61/524,477的权益，其特此通过引用整体并入。

技术领域

本发明涉及源自山药的生物活性蛋白及其用于增加血清雌激素和孕酮水平以及用于治疗骨质疏松症、绝经期综合征和伴随的认知减退的用途。

背景技术

绝经是衰老过程的正常部分，绝经期间由卵巢分泌的雌激素和孕酮的水平逐渐下降。大约80%的妇女经历轻微的或很少的症状。但是，有些妇女具有严重症状，包括：热潮红、严重出汗、焦虑、恐慌或抑郁、皮肤干燥和起皱、阴道干燥和不适、压迫性尿失禁、膀胱炎、失眠、易怒（irritability）和骨质疏松症。世界卫生组织在1990年公布的报告估计，全世界绝经后妇女的总人数为4.76亿。在2030年前，预测的人数将达到12亿。

当前的减轻绝经期综合征的治疗是激素替代疗法(HRT)，其由施用补充性的外源雌激素或雌激素加上孕酮组成，最经常通过使用丸剂、皮下植入物或皮肤贴剂进行。尽管HRT通过给绝经妇女提供外源雌激素来增加循环雌激素水平，但是由于绝经妇女之间的生理条件的个体差异，难以确定适当的剂量和治疗持续时间。结果，HRT有时是无效的，且易于造成副作用，包括子宫内膜瘤、乳腺和卵巢癌、冠心病和中风。

骨质疏松症起因于增加的骨吸收速率和相对地降低的骨形成速率，导致减少的骨量和骨架的微结构衰退，以及增加的骨折风险。骨改建在绝经后岁月大幅增加，并在较老的骨质疏松症患者中保持升高，这表示在绝经期中卵巢激素的丧失是骨质疏松症的主要危险因素之一。这样的骨状态导致妇女中年龄相关的骨骼脆性增加。已经证实，小梁骨矿物质密度、小梁骨体积分数、小梁厚度和小梁数目都随着年龄增长而下降。并且，较低的骨量主要特征在于较小的板/杆比（plate-to-rod ratio）。所有这些变化减弱骨强度和增加骨质疏松性骨折的风险。

承重锻炼在绝经后妇女中具有成骨作用。但是，在老年人中需要剧烈锻炼来产生成骨作用。已经证实，HRT与承重锻炼的联合应用具有协同效应。这表明，施用的雌激素可以增强成骨应答。

选择性雌激素受体调节剂(SERM)是一种补救手段，尤其是用于减轻绝经后骨质疏松症。但是，没有证据表明SERM会增加绝经妇女的内源雌激素水平，并因此可能不会减轻除了骨质疏松症以外的绝经期综合征。

多项研究已经证实，从不同种的山药块茎分离出的蛋白或其它化合物具有抗氧化活性、壳多糖酶活性和免疫调节活性，包括活化雌激素受体。

渴望开发针对绝经期综合征症状的有成本效益的治疗，以便减轻或预防由低血清雌激素水平和孕酮水平引起的骨质疏松症和/或认知减退。

发明内容

本发明提供了源自山药(薯蓣，Dioscorea opposita) 块茎的新颖多肽。所述多肽增加循环雌激素水平、增量调节卵巢促卵泡激素受体(FSHR)的表达、升高卵巢芳香酶(卵巢CYP-19)，并表现出抗骨质疏松活性。

在一个实施方案中，本发明提供了源自薯蓣根茎的分离的或基本上纯的多肽，其中所述多肽具有约32.5 kDA的分子量(通过在SUPERDEX 75 10/300 GL柱上的色谱法确定)和N端序列Gly-Ile-Gly-Lys-Ile-Thr-Thr-Tyr-Trp-Gly-Gln-Tyr-Ser-Asp-Glu-Pro-Ser-Leu-Thr-Glu-Ala  (SEQ ID NO:1)。在一个实施方案中，当将所述肽施用给雌性主体时，血清雌激素和孕酮水平增加。

本发明的另一个方面提供了所述多肽化合物和包含所述多肽化合物的提取物用于在体内和/或在体外增加雌二醇、雌激素和/或孕酮的水平的治疗用途、用于增加芳香酶和/或促卵泡激素受体(FSHR)的表达水平的治疗用途，和用于治疗绝经期综合征的治疗用途。

附图说明

通过不同实施方案的附图和下面给出的详细描述解释本发明。所述附图不应当用于将本发明限定至具体实施方案，而是用于解释和理解。详细描述和附图仅仅是本发明的示例，而不是限制性的，本发明的范围由所附权利要求书及其等同方案限定。附图不是按比例绘制。通过结合附图阅读详细描述会更容易地理解本发明的前述方面和其它伴随的优点。

图1是山药薯蓣的照片。

图2的色谱图显示了在HiPrep 16/10 DEAE FF柱上对薯蓣提取物的纯化。

图3的色谱图显示了在HiPrep 16/10 Phenyl FF (high sub) 柱上对DO蛋白级分的进一步纯化。