[发明专利]2-羟基马尿酸衍生物及其它们的合成方法和用途

说明书

交叉引用

本发明主张美国临时申请，申请号：61/540,940，申请日：2011年9月29日的优选权，该临时申请的所有内容，包括所有表格、附图和权利要求都被全部引用。

技术领域

本发明涉及新的2-羟基马尿酸类似物，用于制备尤其包括蛋白质，多肽，和标记的它的轭合物；该轭合物包括这种2-羟基马尿酸类似物，和它们的合成方法和用途。

背景技术

本发明背景的陈述仅仅是为了帮助读者理解本发明，而不构成对本发明现有技术的描述或阐述。

阿司匹林（乙酰水杨酸）属于非甾体抗炎药（NSAIDs）物。阿司匹林在体内迅速被代谢成水杨酸，然后水杨酸被进一步代谢成各种化合物，包括2-羟基马尿酸和多种葡糖苷酸共轭物。2-羟基马尿酸（也称为水杨尿素）：

2-羟基马尿酸是水杨酸的甘氨酸共轭物，代表排泄尿中阿司匹林的主要（代谢）产物。

已经报道了通过确定阑尾炎疑似患者的尿液中的阈值为10毫克/升的2-羟基马尿酸，可以检测出阑尾炎。该阈值已通过定性，半定量或定量的方法被确定，包括HPLC（高压液相色谱），TLC（薄层色谱法），放射免疫测定法，比色测试，NMR（核磁共振），质谱，电泳，酶等试验方法。

对于2-羟基马尿酸的结合测定的发展，本领域技术人员必须考虑到样品可能含有水杨酸和阿司匹林的其它代谢产物。因此，免疫原性和标记轭合物被设计用于当前的2-羟基马尿酸，以一种特异识别和区分具有略微分子结构差异的方式。用于制备这些轭合物的类似物也应被设计成可以在温和条件下与各种蛋白质，多肽和标记便捷的连接。

发明内容

本发明的目的是提供新的2-羟基马尿酸类似物，以及它们的合成和使用方法。这种类似物被设计有一种活性硫醇（-SH）基团，来提供与靶蛋白，多肽或标记的适宜的基团便捷偶联的化学连接。

第一方面，本发明涉及化合物（或它的盐），其具有以下通式：

其中R1是一个提供官能基团的化学连接，官能基团可以选自：受保护或未受保护的巯基基团，受保护的或未受保护的胺基基团，伯胺反应基团，巯基反应基团，光反应基团，羧基反应基团，精氨酸反应基团，和羰基反应基团。

在某些优选的实施方案中，R1是具有下列结构式的连接基团

其中，

W是C_0-4未被取代的烷基；

X可以是C或O；

Y可以是随意取代的C_0-4烷基或N（H）-C_0-6烷基，Y也可以任意选择存在或不存在；Z是一个功能基团，它可以选自：受保护的或未受保护的巯基基团，受保护的或未受保护的胺基团，伯胺反应基团，巯基反应基团，光反应基团，羧基反应基团，精氨酸反应基团，和羰基反应基团。

为了特异目标分子的附着，这里描述了各种化学连接，通常以此为目的开发结合测定试剂（例如免疫测定）。因此，为了固定固相，半抗原轭合到免疫载体分子上，抗体可检测标记轭合物的制备，免疫毒素和其他标记蛋白和核苷酸试剂等，通过选定的化学连接分子可以被偶联。这种化学连接常给目的分子提供一个或多个结合到多肽的氨基酸侧链上的官能基团。基于其他特征，这些“连接试剂”可以被分类：

1.功能基团和特异的化学性；

2.交联的长度和组成；

3.该官能团（次）是否发生化学或光化学反应;和

4.合成的连接是否容易裂解。

可使用化学连接靶向的活性基团包括伯胺，巯基，羰基，碳水化合物和羧酸。此外，用交联剂如光敏苯基叠氮化物，许多活性基团可被非选择性地偶联。

本领域技术人员对官能基团的选择可以是多种多样的，这取决于与蛋白质，多肽或标记桥联所需的长度和组成，以及所述活性基团是否是游离的或受保护的形式。在后者的情况下，本领域已知各种各样的硫醇保护剂。参见例如：标准的工作参考书，例如：格里斯和瓦茨编著的《有机合成的保护基团》第三版本（Greene and Wuts,PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS,3^rd edition,John Wiley&Sons Inc.,1999）,本文已完整的引用于参考文献中。如本发明所描述所述，优选的Z的末端具有硫醇或受保护的硫醇。合适的巯基保护剂包括双硫代氨基甲酸酯，硫酯，硫醚，硫代内酯，对称的和非对称的二硫化物，和亚氧硫基或亚磺酰。