[发明专利]免疫印迹校准条

说明书

本发明涉及用于检测患者样品中抗体的一种方法和一种器具，该器具具有至少一个孵育通道，在该孵育通道中可能插入免疫印迹条，并且可能将所述条与患者样品、结合物以及底物一起孵育。此外，该器具具有用于目测孵育质量的对照工具。

在医学实验室诊断学领域中，已知不同的测定系统，使用这些系统可以检验患者样品中特异性抗体的存在。由于在病毒或细菌感染性疾病后在患者体内形成抗体，使用此类测定使得诊断急性病或患者已经经受的另外的疾病成为可能。类似地，当选择相对应地适合抗原时，还可能诊断自身免疫性疾病或过敏。

典型地，通过所谓的分段式诊断学检测抗体，其中首先进行敏感性筛选，并且然后进行特异性确认。在此方面，在常规的血清学中，ELISA（酶联免疫吸附测定）通常用于该筛选，而免疫印迹条，更具体地说是蛋白印迹条、斑点印迹条或线点条（line blot strip），主要用作确认测定。

通过检测特异性患者抗体以及它们所属的具体免疫球蛋白类别，可能得出关于以下两点的结论：已经发生的细菌或病毒感染、或急性存在的细菌或病毒感染，以及感染随时间的进展。例如，免疫球蛋白类别IgM的抗体是所谓的早期抗体，而免疫球蛋白类别IgG的抗体典型地是晚期抗体。

为了确保已经正确进行了具体测定并且因此显示正确结果，具有所谓的功能或反应对照带的免疫印迹是已知的，通过该功能或反应对照带可以检查血清或结合物的加入。在此，该结合物包含一种抗体，该抗体偶联至患者血清中的特异性抗体上并且通常源于另外的动物物种。当已添加任何Ig类别的结合物时，常显现相对应的对照带。

然而，相比之下，不可能使用这些测定系统来针对是否使用该测定必需的特异性Ig类别的结合物得到断言。例如，在以此方式设计的一种测定的情况中，当已经将检验条与结合物孵育时，将总是显现一个带；确切地，这种情况将发生而无论是否使用IgM结合物、IgG结合物或IgA结合物。以此方式，如果IgM检验条错误地与IgG结合物孵育，可能忽略例如早期包柔氏螺旋体（Borrelia）病，因为尽管将显现对照带，真实测定将传递出一个阴性结果。因此，在此情况下，治疗将停止于该疾病的早期并且感染可以不引人注意的转换到晚期。

因此，如果希望的话，在检验条的基础上，能够识别是否已经添加血清以及所添加结合物的功能是否正确。

在此方面，DE10000322A1披露了一种具有至少两个不同对照区的免疫印迹条。所描述的检验条首先具有一个血清对照区，该血清对照区通过相对应的对照带指示该检验条已经与患者血清孵育，并且其次还具有至少一个结合物对照区，该结合物对照区指示该检验条已经与来自另外的动物物种的、标记的抗-患者免疫球蛋白抗体孵育。通过提供多个不同的结合物对照区，可能用相对应的检验条确定提供用于该检验的结合物实际上是否已经使用。此外，在该检验条上可任选地提供传感物断开区，使得检查已满足的正确孵育时间成为可能。

作为检验条上一个替代的传感物断开区，还已知提供了一个单独的、预先显色的（predeveloped）校准条，以便比较患者条上的断开对照与校准条的对应传感物区的颜色强度（参见，来自Orgentec Diagnostika GmbH（欧根泰克诊断股份有限公司）的ORG710ANA-9-Line[710-0803-02-d]（2008年3月）的说明书）。将患者条上的断开对照“施加”到校准条的对应带上并比较颜色强度。以此方式，意图在于检查是否已经在可靠条件下进行了该检验。

现有技术中已知的这些方案的一个问题在于当评估这些测定时，考虑到在实验室中实际上占优势的实验条件通常是不令人满意的。例如，已经预孵育的检验条不允许得出关于单独带在不同实验室条件下将显现的强度的任何结论。类似地，有问题的是以下事实：尽管常用的阳性和/或阴性对照允许对与患者血清和/或用正确的结合物进行的孵育作出陈述，相比之下不可能作出关于该测定结果的定量陈述，尤其是当考虑到在具体检验条上显现的带的具体特性时。此外，在考虑到真实实验室和测定条件时，已知的测定系统不检查随着正确孵育时间的顺应性，或相对应的评估也与相当大量的工作相关联，因为每个检验条需要单独检查。在此方面，例如，测定试剂盒是已知的，其中在每个检验条上提供一个断开区并且一旦在该检验条上显现断开带即停止孵育。以此方式进行检验显现出是不利的，特别是对于实验室技术领域朝向日益增大的自动化程度需求的发展而言，因为必须在整个孵育期间观察检验条。