[发明专利]用于评价细菌细胞壁完整性的方法

权利要求书

1.一种用于在作用于细菌细胞壁的抗生素的存在下评价纯培养物中细菌的细胞壁的完整性的方法，其包括：

ⅰ）将作用于细菌细胞壁的抗生素加入到所述细菌的所述纯培养物中，和

ⅱ）确定培养基中胞外DNA片段的存在，

其中，所述培养基中胞外DNA片段的存在指示所述细菌的细胞壁的完整性已被破坏。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法包括在步骤（i）和（ii）之间将来自于步骤（i）的所述培养物的样品固定在载玻片上。

3.一种用于在作用于细菌细胞壁的抗生素的存在下评价存在于培养物中的细菌的细胞壁的完整性的方法，其包括：

ⅰ）将作用于细菌细胞壁的抗生素加入到所述培养物中，

ⅱ）将裂解溶液加入到产生自步骤i）的所述培养物中，其中，所述裂解溶液是对细胞壁已被所述作用于细菌细胞壁的抗生素破坏的细菌特异的裂解溶液，并包含具有在3至11.5之间的pH的缓冲液，和

ⅲ）确定细菌类核的存在，

其中，所述培养基中细菌类核的存在指示所述细菌的细胞壁的完整性已被破坏。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，存在于所述培养物中的细菌属于相同物种或不同物种。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其中，所述裂解溶液进一步包含上达至3%的离子型去污剂或非离子型去污剂。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述离子型去污剂是选自由以下组成的组的去污剂：十二烷基硫酸钠、烷基苯磺酸酯、月桂酰肌氨酸、甘氨胆酸盐水合物及它们的混合物。

7.根据权利要求5所述的方法，其中，所述非离子型去污剂选自由以下组成的组：叔辛基苯氧基聚乙烯乙氧基乙醇、N,N-双(3-D-葡糖酰氨基丙基)胆酰胺、二十三乙二醇十二烷基醚、N-癸酰基-N-甲基谷氨酰胺、洋地黄皂苷、十二酰基-N-甲基葡糖酰胺、庚酰基-N-甲基谷氨酰胺、支链的辛基苯氧基聚(乙烯氧基)乙醇、N-壬酰基-N-甲基葡糖胺、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇、N-辛酰基-N-甲基谷氨酰胺、司盘20溶液和聚山梨醇酯20。

8.根据权利要求3至7中任一项所述的方法，其中，所述裂解溶液进一步包含上达至3M浓度的盐。

9.根据权利要求3或4所述的方法，其中，所述裂解溶液包含0.2M的(羟甲基)-1,3-丙二醇、0.025%的十二烷基硫酸钠、0.5M或0.05M的氯化钠，且pH为10。

10.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述裂解溶液包含0.2M的(羟甲基)-1,3-丙二醇、5%的Triton X-100、1M的氯化钠、且pH为10。

11.根据权利要求3或4所述的方法，其中，所述裂解溶液包含0.3M的磷酸氢二钠、2%的十二烷基硫酸钠、0.05M的乙二胺四乙酸，且pH为11.45。

12.根据权利要求3至11中任一项所述的方法，其中，所述方法进一步包括在步骤（ii）之前或之后将来自所述培养物的样品固定在载体上。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中，通过染色来进行培养基中胞外DNA片段的存在或细菌类核的存在的观察。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，通过使用一种或多种荧光染料来进行所述染色。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述荧光染料选自由以下组成的组：赫斯特33342、赫斯特33258、DAPI、色霉素A3、光神霉素、溴化乙啶、吖啶橙、噻唑橙、7-AAD、青色素衍生物和荧光染料TOTO、YOYO、BOBO、POPO、JOJO、LOLO、SYTOX、PO-PRO、BO-PRO、YO-PRO、TO-PRO、JO-PRO、PO-PRO和LO-PRO的变异体。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中，所述作用于细菌细胞壁的抗生素选自由以下组成的组：β-内酰胺类抗生素、异烟肼、乙硫异烟胺、乙胺丁醇、环丝氨酸和糖肽类抗生素。

17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述β-内酰胺类抗生素选自由以下组成的组：青霉素、头孢菌素、头霉素、碳头孢烯、碳青霉烯、单酰胺菌素和β-内酰胺酶抑制剂。