[发明专利]检测生物分子的方法

说明书

本发明涉及用于检测存在于复杂生物样品中生物分子的方法，其包括步骤：根据所述生物分子的至少一种物理性质将所述生物样品分离成多个级分；和特异性检测存在于级分中的生物分子，使用至少一种基于固相的免疫检测方法，所述免疫检测方法使用可区分的微球，其对于每个级分是特异性的。

本发明涉及一种方法，该方法使得可以检测在生物材料中的生物分子，更具体地是蛋白和/或肽或消化而形成的肽的蛋白。

此类型的方法是从现有技术众所周知的。

生物分子，更具体地来自少量的生物材料的蛋白和/或肽的特异性检测，是用于研究和医疗诊断的重要要求。

因此，新开发的目的是增加已知检测方法，更具体地是蛋白检测方法的灵敏度。更具体地，目的是能够在一个样品中同时检测和定量大量不同的蛋白或蛋白变体。

在蛋白的检测中已带来显著进步的技术发展具体是基于质谱和微阵列的方法。

质谱方法能够从复杂的样品中以明确的方式检测大量不同的蛋白。尽管在分离和检测技术中的巨大进步，因为来自小样品量的蛋白的灵敏的检测经常由于系统限制而不可能，所以灵敏度是此技术的关键问题。

第二个关键问题是质谱分析相关的成本。为了允许特异性蛋白检测，需要复杂和成本密集的样品制备和蛋白分离技术，并且用于此目的所需的设备（即实际的质谱仪）的成本非常高。

结果是质谱分析在一些专业的实验室中进行，并且只有一小部分可用的诊断检测方法是基于这种技术。

因此免疫测定，如免疫组化、直接免疫测定和夹心免疫测定，在研究实验室中并也在临床分析中是大大更为重要的分析方法。它们通常允许在复杂样品中蛋白的特异性检测而无需进行复杂的样品制备。

可实现的灵敏度可以达到低至飞摩尔的浓度范围，且测量信号的特异性可以是非常高的。

近年来，已做出了很大的努力，以将免疫测定从个别参数的确定变成多重格式，使其从而可以同时检测大量不同蛋白。

例如，已经开发了蛋白微阵列，其以在平面支持物上或微球上的固相测定法的形式，代表免疫测定的显著的小型化，其允许来自几微升样品体积的几十个到数百个不同蛋白的检测和定量。

在这些基于抗体的方法中，问题首先是缺少结合亲和性分子，即缺少抗体，其是灵敏和特异性的免疫测定的前提。第二个问题是所用的抗体彼此的交叉反应性和与不同分析物蛋白的交叉反应性。

当同时检测多于约20种蛋白时，这些限制经常导致检测方法的灵敏度明显降低。

还已知免疫印迹，也称为Wstern印迹，其首先包括在支持物基质中使用凝胶电泳以根据它们的大小、电荷或其它物理性质分离蛋白成带（band），并然后转移这些带到膜上，然后在那里蛋白可以进行抗体结合事件。

此方法被如上述免疫测定的相同的缺点所阻碍。

鉴于上述情况，本发明的一个目标是提供在开始时提到的那种类型的简单且廉价地可实施的方法，使用该方法可以特异且灵敏地从少量的生物材料中检测生物分子的多样性，所述生物分子更具体是蛋白或肽，或消化而形成的肽的蛋白。

根据本发明，此目标通过开始时提到的那种类型的方法实现，其包括步骤：

a）根据所述生物分子的至少一种物理性质将所述生物样品分离成多个级分；和

b）使用至少一种基于固相的免疫学检测方法特异性检测存在于级分中的生物分子，其涉及将所述生物分子从各个级分固定到对于每种级分是特异的并且彼此可区分的微球群体上。

本发明的目的以这种方式完全地实现。