[发明专利]来自苹果的主要变应原Mal d 1的低变应原性变体

权利要求书

1.苹果（Malus domestic）主要变应原Mal d1wt（SEQ ID NO:1）或其与SEQ ID NO:1至少95%，优选至少97%相同的同种型的序列变体，所述变体的特征是：

a)其表现出比所述Mal d1变应原（SEQ ID NO:1）降低的IgE反应性；

b)其具有这样的氨基酸序列，当与SEQ ID NO:1比对时，所述氨基酸序列在与SEQ ID NO:1的第25位和第78位对应的Asp和/或Asn残基上存在至少一个，优选两个取代。

2.权利要求1的序列变体，其中相比Mal d1变应原SEQ ID NO:1，来自对苹果和/或垂枝桦（Betula verrucosa）花粉过敏的患者的血清的IgE反应性降低至少10%。

3.权利要求1-2的序列变体，其中所述Asp和Asn残基都被取代。

4.权利要求1-3的序列变体，其中：

-Asp25残基被中性、极性或碱性的氨基酸取代，所述氨基酸优选选自Ala、Thr、Gly、Pro、Leu、Ile、Ser、Phe、Lys和Arg，更优选Ala、Thr、Ser、Gly、Lys和Arg；

-Asn78残基被中性、酸性或碱性的氨基酸取代，所述氨基酸优选选自Ala、Gly、Pro、Leu、Ile、Phe、Lys、Arg、Asp和Glu，更优选Ala、Gly、Lys、Arg、Asp和Glu。

5.权利要求1-4的序列变体，由SEQ ID NO:2组成。

6.含有权利要求1-5定义的苹果主要变应原的序列变体和垂枝桦花粉的主要变应原Bet v1的低变应原性变体的杂交蛋白质，任选由接头分隔开。

7.权利要求6的杂交蛋白质，其中所述Bet v1低变应原性变体是通过取代SEQ ID NO:5的第54、115和/或123位或其同种型的相应位置上的一个或多个Lys残基从蛋白质SEQ ID NO:5或其同种型获得的，所述同种型与SEQ ID NO:5具有至少94%，优选至少97%序列同一性。

8.权利要求7的杂交蛋白质，其中所述Lys残基被选自Ala、Thr、Gly、Pro、Leu、Ile、Phe和Ser的中性或极性氨基酸取代。

9.权利要求6-8的杂交蛋白质，其中所述Bet v1低变应原性变体由SEQ ID NO:6组成。

10.权利要求6-9的杂交蛋白质，其中所述Mal d1和Bet v1低变应原性变体以头-尾的方向位于氨基末端或羧基末端。

11.权利要求10的杂交蛋白质，其中Bet v1和Mal d1分别位于氨基末端和羧基末端。

12.权利要求6-11的杂交蛋白质，其中所述接头由含有1-8个氨基酸的氨基酸序列，优选EF二肽，组成。

13.权利要求12的杂交蛋白质，由SEQ ID NO:4组成。

14.编码权利要求1-5的Mal d1低变应原性变体，或编码权利要求6-13的杂交蛋白质的核酸分子。

15.权利要求14的核酸分子，其序列选自SEQ ID NO:10和19。

16.含有权利要求14-15的核酸分子的表达载体。

17.药物组合物，其包含有效量的权利要求1-5的Mal d1的低变应原性变体或权利要求6-13的杂交蛋白质，和可药用载体、赋形剂或佐剂。

18.权利要求17的组合物，其处于适合舌下、皮下或透皮施用的形式。

19.权利要求1-5的Mal d1低变应原性变体，或权利要求6-13的杂交蛋白质，或权利要求17-18的药物组合物，用于对苹果和/或垂枝桦花粉过敏的对象的免疫疗法。

20.权利要求19的用于对苹果和/或垂枝桦花粉过敏的对象的免疫疗法的低变应原性变体或杂交蛋白质或药物组合物，其中所述对象患支气管哮喘、鼻炎、结膜炎或口服变态反应综合征。