[发明专利]来自苹果的主要变应原Mal d 1的低变应原性变体

说明书

本发明涉及Mal d1蛋白质的低变应原性序列变体、编码其的核酸分子、包含其的药物组合物以及它们在由苹果（Malus domestica）物种导致的变应性疾病的免疫疗法中的用途。 

背景技术

变态反应由免疫系统功能异常导致，所述免疫系统通过产生IgE-类抗体与主要包含在花粉、螨、上皮和食品中的无害蛋白质反应。 

最近的评估表明工业化国家中超过25％的人口患有该疾病，如果疾病持续不愈，则可以导致症状恶化（例如出现哮喘）或对其他变应原致敏，由此造成更难以选择最适当的治疗。 

在世界范围内，约三分之一的变应性对象是对树木花粉过敏。在温带地区，属于山毛榉目(Fagales)的树（桦树、桤木、榛树、橡树和角树）的花粉是变应性哮喘和鼻炎的主要原因之一。对桦树花粉变应的患者约95%产生抗Bet v1的IgE抗体，60%的这类患者仅与Bet v1（以登录号X15877保存在GenBank的cDNA）反应，这是桦树花粉的主要变应原（1）。 

在食用某些食物（苹果、胡萝卜、榛子和芹菜）后，对桦树花粉变应的个体高百分比（50%-93%）出现变应反应。桦树花粉变应患者中的这类超敏性被描述为“花粉-食物综合征（PFS）”，其特征是对水果、坚果和蔬菜的变应性。症状范围从上消化道粘膜的反应（口服变态反应综合征）和胃肠道的反应至荨麻疹和哮喘，在某些情况下可以导致过敏性休克。对水果的负面反应最常见于苹果中。在由桦树花粉导致的花粉热的情况下，该综合征主要是由Bet v1最初诱导的交叉反应性IgE抗体介导（2）。 

这类患者的治疗主要基于避免从膳食中摄入食物变应原。对于治疗对花粉、动物和螨的变态反应，已经证实了脱敏特异性免疫疗法（SIT）是有效的病原治疗形式，与药理治疗不同，前者积极地影响着作为这类疾病的 基础的一些免疫学参数。SIT涉及施用增加剂量的获自导致疾病的物质的标准提取物（疫苗）（3）。以这种方式，在患者中逐步诱导出对该物质的一类“免疫耐受”，同时伴随着变态反应症状的降低（如果不是消失的话）。但是，考虑到引起严重副作用（包括过敏性休克）的高风险，特定的免疫疗法通常不用于治疗食物变态反应。 

虽然Bet v1和同源食物蛋白质之间的交叉反应性是PFS诱导的反应的潜在原因，但已发现，使用桦树花粉的SIT不导致食物变态反应症状的任何改善。 

在胡萝卜变态反应中已经观察到了该无效作用，胡萝卜变态反应主要是由Bet v1的同源物——变应原Dau c1导致的，其中初发敏化作用是对桦树变应原发生的，而在食用胡萝卜后，后续的敏化作用则是针对不与Bet v1交叉反应的Dau c1的新表位的（4）。 

在治疗苹果变态反应中，使用桦树花粉提取物的SIT产生了有争议的，有时是有利的结果，可能是由于Bet v1和Mal d1之间更高的序列同一性导致的（氨基酸序列为60%，与Dau c1仅为40%）。 

在1998年的一项研究中，用基于桦树花粉提取物的SIT治疗的对桦树和苹果过敏的患者中的84%的患者中，经过第一年的治疗后，出现食用苹果后的OAS（口服变态反应综合征）症状的显著降低（50%-95%）或完全消失（5）。在2004年公开的一项更新的研究中，使用桦树花粉提取物的SIT仅在3个月的治疗后，就导致了对Bet v1和Mal d1的SPT反应性的显著降低。由Bet v1强烈诱导的IgG4抗体表现出与Mal d1的交叉反应性，因此支持这样的假设，即，抗桦树花粉变态反应的SIT也可以降低对含有Bet v1同源性变应原的食物变态反应（6）。同年公开的另一项研究（2004）显示，在对桦树和苹果过敏的患者中，基于桦树花粉提取物的SIT显著改善了由花粉导致的变应性症状，但不降低苹果变态反应的严重程度（7）。 

因此，基于现有知识，不能确定的认为使用桦树花粉变应原的免疫疗法为对含有Bet v1同源物的食物的变态反应的情形提供显著好处，所述情形因此应该作为独立的疾病进行治疗。 

针对Bet v1的PFS交叉反应性最常涉及的变应原之一是Mal d1，这是属于蔷薇科（Rosaceae）的水果——苹果——的主要变应原。Mal d1与Bet v1共享约60%的氨基酸序列（同一性），交叉反应性实验证实了存在共同的IgE和T表位（8,9）。