[发明专利]使用从酸预处理获得的碳底物由丝状真菌连续生产纤维素酶的方法

权利要求书

1.用于在搅拌和通气的生物反应器中使用丝状真菌菌株生产纤维素酶和半纤维素酶的方法，其包括至少两个阶段：

· 用于在封闭反应器中在至少一种碳质生长底物存在的情况下使所述菌株生长的阶段a)，所述生长阶段以10-90 g/L范围的碳质生长底物浓度实施；

· 用于连续生产纤维素酶的阶段b)，其中在至少多于200h的期间内以恒定的供给速率供给至少一种碳质诱导物底物，所述碳质诱导物底物是从木质纤维素底物的酸预处理获得的至少一种半纤维素水解物水溶液，所述半纤维素水解物水溶液不进行预先灭菌也不进行pH校正，所述水溶液的pH范围为0.5-3，反应体积量通过取出一部分所述反应体积而保持恒定，所述阶段b)以0.002-0.008 h^-1范围的稀释速率进行操作。

2.根据权利要求1的方法，其中所述菌株是通过突变、选择或遗传重组而修饰的里氏木霉菌株。

3.根据权利要求1或权利要求2的方法，其中所述生长阶段中使用的碳质生长底物选自葡萄糖、乳糖、木糖、木质纤维素底物的酶水解物的单体糖的乙醇发酵后获得的残留物和源自预处理的木质纤维素底物的单体形式的半纤维素级分的提取物，所述碳质生长底物单独使用或作为混合物使用。

4.根据权利要求1-3中任一项的方法，其中酸预处理是预先用硫酸水溶液浸渍所述木质纤维素底物，然后酸水解、酸烹煮或蒸汽爆破。

5.根据权利要求1-4中任一项的方法，其中阶段b)中使用的碳质诱导物底物是作为从木质纤维素底物的酸预处理获得的半纤维素水解物水溶液与至少一种选自诱导物糖或非诱导物糖的其它碳质底物的混合物。

6.根据权利要求1-5中任一项的方法，其中用于连续生产纤维素酶的阶段b)的持续时间多于至少300 h。

7.根据权利要求6的方法，其中用于连续生产纤维素酶的阶段b)的持续时间多于至少400 h。

8.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中所述碳质诱导物底物的供给流速范围为35-140 mg的碳质诱导物底物每克干重菌株每小时。

9.根据权利要求1-8中任一项的方法，其中在阶段b)中所述供给流速逐渐增加。

10.根据权利要求1-9中任一项的方法，其中在阶段a)和阶段b)之间实施连续供给至少一种碳质诱导物底物的用于在反应器中生长和生产的任选阶段a’)，在所述阶段a’)过程中，不发生从发酵罐的连续取出。

11.根据权利要求10的方法，其中阶段a’)中使用的所述碳质诱导物底物与阶段b)中使用的碳质诱导物底物是相同的。

12.根据权利要求10或权利要求11的方法，其中阶段a’)在范围为50-150 h的期间实施。