[发明专利]在混合式层析中去除杀病毒剂

说明书

相关专利申请的交叉参考

本申请要求2011年10月26日提交的美国临时专利申请号61/551.735的优先权，该文通过引用纳入本文用于所有目的。

技术背景

由体内或体外方法产生的天然和重组蛋白需要使用杀病毒条件或化合物的处理以确保接受基于这些蛋白的治疗的患者的安全性。许多杀病毒剂是有毒性的。杀病毒治疗的并发症是杀病毒剂本身可能形成与处理的蛋白产物的稳定结合。这些结合可能使得从蛋白制剂中完全去除杀病毒剂变得困难或不可能。

发明内容

提供了从生物分子制剂中去除阳离子型或中性杀病毒剂的方法。

在一些实施方式中，该方法包括将包括目标生物分子和杀病毒剂的生物分子制剂与混合式支持物在允许目标生物分子和杀病毒剂与支持物结合的条件下接触，其中混合式支持物具有疏水性和带负电的部分；并且在使得杀病毒剂仍然与支持物结合的条件下从支持物上洗脱生物分子目标。在其他实施方式中，如下面详述，在生物分子的洗脱之前洗脱杀病毒剂。

在一些实施例中，生物分子是蛋白。在一些实施方式中，所述蛋白是抗体。在一些实施方式中，抗体是IgM或IgG抗体。

在一些实施方式中，混合式支持物包括与由单体3-烯丙氧基-1，2-丙二醇、乙烯基吡咯烷酮(vinylpyrrolidinone)的聚合产生并且与N，N’-亚甲基双丙烯酰胺交联的多孔基质相连的对氨基马尿酸。在一些实施方式中，混合式支持物包括包含2-(苯甲酰氨基)丁酸取代基的混合式配体。在一些实施方式中，混合式支持物包括选自己酸、苯丙氨酸和聚甲基丙烯酸酯的叔丁基醚衍生物的混合式配体。

在一些实施方式中，当与混合式支持物接触时，生物分子制剂具有4-6的pH。在一些实施方式中，当与混合式支持物接触时，生物分子制剂具有4.5-5.5的pH。

在一些实施方式中，所述方法还包括在接触和洗脱之间用洗涤溶液洗涤支持物。在一些实施方式中，洗涤溶液包括至少0.1M(例如，至少0.5M、1.0M、1.5M、2M等)的钠。

在一些实施方式中，洗脱包括升高与结合到支持物的目标生物分子接触的溶液的pH。

在一些实施方式中，杀病毒剂选白聚乙烯亚胺、依沙吖啶、氯己定、苯扎氯铵和亚甲蓝。在一些实施方式中，杀病毒剂是磷酸三(正丁基)酯(TNBP)。

在一些实施方式中，该方法还包括在目标生物分子的洗脱之后洗脱杀病毒剂。

在一些实施方式中，该方法包括将包括目标生物分子和杀病毒剂的生物分子制剂与混合式支持物在允许目标生物分子和杀病毒剂与支持物结合的条件下接触，其中混合式支持物具有疏水性和带负电的部分；用洗涤溶液洗涤支持物使得杀病毒剂被去除，但是目标分子仍然结合在支持物上；并且从支持物上洗脱生物分子目标。

在一些实施方式中，洗涤溶液包括至少0.1M(例如，至少0.5M、1.0M、1.5M、2M等)的钠。

在一些实施例中，生物分子是蛋白。在一些实施方式中，所述蛋白是抗体。在一些实施方式中，抗体是IgM或IgG抗体。

在一些实施方式中，混合式支持物包括与由单体3-烯丙氧基-1，2-丙二醇、乙烯基吡咯烷酮(vinylpyrrolidinone)的聚合产生并且与N，N’-亚甲基双丙烯酰胺交联的多孔基质相连的对氨基马尿酸。在-些实施方式中，混合式支持物包括包含2-(苯甲酰氨基)丁酸取代基的混合式配体。在一些实施方式中，混合式支持物包括选自己酸、苯丙氨酸和聚甲基丙烯酸酯的叔丁基醚衍生物的混合式配体。

在一些实施方式中，当与混合式支持物接触时，生物分子制剂具有4-6的pH。在一些实施方式中，当与混合式支持物接触时，生物分子制剂具有4.5-5.5的pH。

在一些实施方式中，洗脱包括升高与结合至支持物上的目标生物分子接触的溶液的pH。

在一些实施方式中，杀病毒剂选白聚乙烯亚胺、依沙吖啶、氯己定、苯扎氯铵和亚甲蓝。在一些实施方式中，杀病毒剂是磷酸三(正丁基)酯(TNBP)。

也提供了与目标生物分子和杀病毒剂接触的混合式支持物，其中该混合式支持物具有疏水性和带负电的部分。

在一些实施例中，生物分子是蛋白。在一些实施方式中，所述蛋白是抗体。在一些实施方式中，抗体是IgM或IgG抗体。