[发明专利]用于分泌产生蛋白质的方法

权利要求书

1.一种具有分泌产生异源蛋白质的能力的棒状杆菌型细菌，

该细菌已经过修饰而降低了青霉素结合蛋白质的活性，且该细菌中已经降低了细胞表层蛋白质的活性，并且

其中所述青霉素结合蛋白质是具有如下性质的蛋白质：当该蛋白质在棒状杆菌型细菌中的活性被降低时，所述异源蛋白质的分泌产生量相比于未修饰的菌株中观察到的分泌产生量增加。

2.根据权利要求1的棒状杆菌型细菌，其已经过修饰从而通过弱化编码所述青霉素结合蛋白质的基因的表达或破坏该基因而降低了所述青霉素结合蛋白质的活性。

3.根据权利要求1或2的棒状杆菌型细菌，其中所述青霉素结合蛋白质是PBP1a。

4.根据权利要求1-3中任一项的棒状杆菌型细菌，其中所述青霉素结合蛋白质是在下面(A)或(B)中定义的蛋白质：

(A)具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的蛋白质，

(B)具有包括1-10个氨基酸残基的取代、缺失、插入或添加的SEQ ID NO:82的氨基酸序列，并且具有如下性质的蛋白质：当该蛋白质在棒状杆菌型细菌中的活性被降低时，所述异源蛋白质的分泌产生量相比于未修饰的菌株中观察到的分泌产生量增加。

5.根据权利要求1-4中任一项的棒状杆菌型细菌，其已经过修饰从而通过弱化编码所述细胞表层蛋白质的基因的表达或破坏该基因而降低了所述细胞表层蛋白质的活性。

6.根据权利要求1-5中任一项的棒状杆菌型细菌，其中所述细胞表层蛋白质是CspB。

7.根据权利要求1-6中任一项的棒状杆菌型细菌，其中所述细胞表层蛋白质是在下面(A)或(B)中定义的蛋白质：

(A)具有SEQ ID NO:98氨基酸序列的蛋白质，

(B)具有包括1-10个氨基酸残基的取代、缺失、插入或添加的SEQ ID NO:98的氨基酸序列，并且具有如下性质的蛋白质：当该蛋白质在棒状杆菌型细菌中的活性被降低时，所述异源蛋白质的分泌产生量相比于未修饰的菌株中观察到的分泌产生量增加。

8.根据权利要求1-7中任一项的棒状杆菌型细菌，其是属于棒状杆菌属(Corynebacterium)或短杆菌属(Brevebacterium)的细菌。

9.根据权利要求1-8中任一项的棒状杆菌型细菌，其是谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)。

10.根据权利要求1-9中任一项的棒状杆菌型细菌，

其中所述棒状杆菌型细菌具有用于分泌表达所述异源蛋白质的基因构建体，并且

其中所述基因构建体包括：在所述棒状杆菌型细菌中发挥功能的启动子序列，连接在该启动子序列下游的、编码在所述棒状杆菌型细菌中发挥功能的信号肽的核酸序列，以及连接在该编码信号肽的核酸序列下游的、编码所述异源蛋白质的核酸序列。

11.根据权利要求1-10中任一项的棒状杆菌型细菌，其中所述异源蛋白质是抗体相关分子。

12.根据权利要求11的棒状杆菌型细菌，其中该抗体相关分子由选自Fab、F(ab')₂、Fc-融合蛋白质和scFv中的一种或多种蛋白质构成。

13.一种用于产生异源蛋白质的方法，其包括培养根据权利要求1-12中任一项的棒状杆菌型细菌，并收集分泌产生的异源蛋白质。