[发明专利]用于分泌产生蛋白质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及高效分泌生产异源蛋白质的棒状杆菌型细菌，和用于分泌产生异源蛋白质的方法。

背景技术

关于用微生物分泌产生异源蛋白质，迄今为止已经报道了利用芽孢杆菌属细菌(Bacillus bacterium)(非专利文件1)、甲醇同化酵母(methanol-assimilating yeast)、巴斯德毕赤酵母(非专利文件2)、曲霉菌属的丝状真菌(非专利文件3和4)等分泌产生异源蛋白质。

也有人尝试用棒状杆菌型细菌分泌产生异源蛋白质。关于用棒状杆菌型细菌分泌产生异源蛋白质，已经有报道用谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum，下文也缩写为C.glutamicum)分泌核酸酶和酯酶(专利文件1、非专利文件5)，分泌蛋白质酶如枯草杆菌蛋白质酶(非专利文件6)，利用棒状杆菌型细菌细胞表层蛋白质PS1和PS2(也称作CspB)的信号肽来分泌蛋白质(专利文件2)，使用PS2(CspB)的信号肽来分泌纤连蛋白结合蛋白质(非专利文件7)，利用棒状杆菌型细菌的细胞表层蛋白质PS2(CspB)和SlpA(也称作CspA)的信号肽来分泌转谷氨酰胺酶原(protransglutaminase)(专利文件3)，使用变体型分泌系统分泌蛋白质(专利文件4)，用变体菌株分泌转谷氨酰胺酶原(专利文件5)，利用Tat依赖性信号肽来分泌蛋白质(专利文件6)等。

有多种蛋白质被考虑作为用来分泌产生的蛋白质。然而，关于用棒状杆菌型细菌分泌产生异源蛋白质，尚未有任何由多个亚单位构成的多聚体蛋白质(例如抗体相关分子)的分泌产生的报道。

青霉素结合蛋白质(PBP)是与β-内酰胺型抗生素结合的蛋白质的总称，与β-内酰胺型抗生素的结合抑制它们的酶功能。PBP一般是膜结合蛋白质，它们被认为对细菌细胞壁的合成是必不可少的。PBP根据其分子量分为高分子量PBP(HMW-PBP)和低分子量PBP(LMW-PBP)。其中，HMW-PBP进一步分为A类高分子量PBP(A类HMW-PBP)和B类高分子量PBP(B类HMW-PBP)。A类HMW-PBP具备用于交联肽聚糖部分的具有转肽酶活性的转肽酶活性域，和用于从二糖从二糖形成多糖链的具有转糖基酶活性的转糖基酶活性域；而B类HMW-PBP仅具有转肽酶活性域。

关于谷氨酸棒状杆菌的PBP的发现在非专利文件8、9等中有详细描述。在谷氨酸棒状杆菌中，迄今为止至少发现了9种PBP同源物。其中5种是HMW-PBP，包括两种A类HMW-PBP(PBP1a、PBP1b)和三种B类HMW-PBP(FstI、PBP2a、PBP2b)。已知谷氨酸棒状杆菌的A类HMW-PBP是负责细胞伸展的因子，B类HMW-PBP是在细胞分裂时负责形成隔膜壁的肽聚糖的因子。

细胞表层蛋白质是构成细菌和古细菌细胞表层(S-层)的蛋白质。作为棒状杆菌型细菌的细胞表层蛋白质，已知有谷氨酸棒状杆菌的PS1和PS2(CspB)(非专利文件10)、C.stationis的SlpA(CspA)(专利文件2)等。例如，关于PS2(CspB)，已经报道了28种谷氨酸棒状杆菌菌株CspB同源物的氨基酸序列(非专利文件11)。如上所述，棒状杆菌型细菌的细胞表层蛋白质的信号肽被用于分泌产生蛋白质(专利文件2、3等)。

然而，关于减少青霉素结合蛋白质的活性和/或减少细胞表层蛋白质的活性与分泌产生异源蛋白质之间的关系尚不清楚。

现有技术参考文献

专利文件

专利文件1:美国专利No.4,965,197

专利文件2:日本专利特表平6-502548

专利文件3:日本专利4320769

专利文件4:日本专利特开平11-169182

专利文件5:日本专利4362651

专利文件6:日本专利4730302

非专利文件

非专利文件1:Microbiol.rev.，57，109-137(1993)

非专利文件2:Biotechnol.，11，905-910(1993)

非专利文件3:Biotechnol.，6，1419-1422(1988)

非专利文件4:Biotechnol.，9，976-981(1991)

非专利文件5:J.Bacteriol.，174，1854-1861(1992)