[发明专利]用于对抗体的糖基化进行测定的方法

权利要求书

1.一种用于对抗体与存在于测量介质中的细胞膜或完整细胞表达的Fc受体的结合进行测定的体外方法，所述方法包括如下步骤：

(i)用FRET伴侣对的第一成员对所述Fc受体进行直接或间接标记，或者向所述介质中引入其Fc受体已预先被所述FRET伴侣对的第一成员直接标记的细胞膜或完整细胞；

(ii)向所述测量介质中加入用所述FRET伴侣对的第二成员直接或间接标记的所述抗体；

(iii)对FRET信号进行测量，所述FRET信号的存在表示所述抗体与所述Fc受体的结合。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，用不同的抗体浓度重复所述方法；并且，所述方法包括对抗体-Fc受体键的解离常数进行测定的附加步骤(iv)。

3.一种通过与参比抗体进行竞争，对竞争性抗体与存在于测量介质中的细胞膜或完整细胞表达的Fc受体的结合进行测定的体外方法，所述方法包括如下步骤：

(i)用FRET伴侣对的第一成员对所述Fc受体进行直接或间接标记，或者向所述介质中引入其Fc受体已预先被所述FRET伴侣对的第一成员直接标记的细胞膜或完整细胞；

(ii)向所述测量介质中加入所述竞争性抗体；

(iii)向所述测量介质中加入用所述FRET伴侣对的第二成员直接或间接标记的所述参比抗体；

(iv)对FRET信号进行测量，与不存在所述竞争性抗体时测得的信号相比，在存在所述竞争性抗体的情况下测得的信号的降低表示所述竞争性抗体与所述Fc受体的结合。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，用不同量的竞争性抗体重复步骤(ii)，步骤(iii)中加入的参比抗体的量是固定的；其特征还在于，所述方法包括对所述竞争性抗体的EC50进行测定并将其与所述参比抗体的EC50进行比较的附加步骤(v)。

5.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述参比抗体和所述竞争性抗体在以下方面明显不同：所述竞争性抗体由目的在于改变其Fc片段的糖基化水平的方法生产，或者经过目的在于改变其Fc片段的糖基化水平的处理。

6.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述参比抗体和测试抗体在以下方面明显不同：所述测试抗体由目的在于改变其Fc片段的岩藻糖基化水平的方法生产，或经过目的在于改变其Fc片段的岩藻糖基化水平的处理。

7.一种用于对抗体的糖基化水平进行测定的方法，所述方法包括如下步骤：

-实施如权利要求4所述的方法，在所述步骤(ii)中使用糖基化或去糖基化水平已知的数种竞争性抗体；然后

-实施如权利要求4所述的方法，在所述步骤(ii)中使用糖基化水平待测定的抗体；以及

-通过将测试抗体的EC50与所述糖基化或去糖基化水平已知的竞争性抗体的EC50相比较，测定所述测试抗体的糖基化水平。

8.一种用于对抗体的岩藻糖基化水平进行测定的方法，所述方法包括如下步骤：

-实施如权利要求4所述的方法，在所述步骤(ii)中使用数种岩藻糖基化或去岩藻糖基化水平已知的竞争性抗体；然后

-实施如权利要求4所述的方法，在所述步骤(ii)中使用岩藻糖基化或去岩藻糖基化水平待测定的抗体；以及

-通过将测试抗体的EC50与所述岩藻糖基化或去岩藻糖基化水平已知的竞争性抗体的EC50相比较，测定所述测试抗体的岩藻糖基化水平。

9.如在先权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述Fc受体是γFc受体。

10.如在先权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述Fc受体是CD16a受体或其变体。

11.如在先权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述Fc受体经由自杀酶直接进行标记，即，其特征在于，所述Fc受体以包含所述Fc受体和所述自杀酶的融合蛋白的形式表达；其特征还在于，通过向所述测量介质中加入缀合有FRET伴侣之一的所述酶的底物实施标记。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述自杀酶选自：O6-烷基鸟嘌呤DNA烷基转移酶突变体、脱卤素酶突变体或酰基载体蛋白片段。

13.如在先权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，用完整细胞实施所述方法。