[发明专利]通过尿分析来定量肾标志物的方法

说明书

1.发明领域

本发明的领域为尿肾脏病学的领域。更确切而言，本发明涉及泌尿系统的病理学状态的体外诊断方法。

2.现有技术

肾疾病可以损害肾的不同的结构区室：血管、肾小球、肾小管、间质。这些损害导致急性和/或慢性肾功能不全，其最后发展是肾的功能单元的完全破坏，所述肾的功能单元被细胞外基质的扩展所代替，即肾纤维化。各种各样的病因学相应于肾的这些损害：排泄道的阻塞、炎症、自身免疫性、变态反应、沉积疾病、高血压、糖尿病、血管病、局部缺血、毒性，等等。肾疾病可以触及天生的肾或在肾移植后的同种异体移植物。在法国，估计每年有3000个新的移植患者病例(肾脏、心脏、肝脏、骨髓、肺，等等)。对于经移植的患者的系统随访使得能够研究向着纤维化发展的肾疾病的早期时间。上皮-间充质转变(epithelio-mesenchymal transition；EMT)的标志物在肾组织中的表达使得能够早期地检测肾组织的纤维性疾病，其可以由局部缺血、排斥或免疫抑制剂(特别是环孢菌素A(CsA))的毒性引起(Slattery等人,Am J Pathol.2005年8月,167(2):395-407；Hertig等人,American Journal of Transplantation,2006；Galichon等人,Fibrogenesis Tissue Repair,2011；Galichon等人,Transplantation,2011)。

EMT是这样的动态过程，在其过程中细胞丧失其上皮特征并获得间充质特征。这些改变同时影响细胞的形态学以及其运转。当它损害肾小管细胞时，它表现出向着纤维化和慢性肾功能不全的发展(Hertig等人,J Am Soc Nephrol,2008)。因此，需要在已经经历了移植的患者中监视该现象的出现以便调整或修改免疫抑制治疗。

目前，用于检测和监视任何肾病理学状态的参考方法是活组织检查。活组织检查在于通过经皮、经静脉或手术途径抽取肾中的组织探心试样。然后，使该样品经历组织学检查以检测病理学状态的可能征候(肾小球、肾小管、血管或间质区室的破坏、细胞浸润或肥大)。

然而，该方法包括多个缺点。样品抽取对于患者来说不是没有风险。观察到许多并发症，例如血尿，阻塞性肾功能不全甚至无尿症，在肾周区域中血肿的出现，动静脉瘘的出现，和更罕见地出血，移植物丢失，死亡。除了与任何侵入性动作相关的风险外，还可能的是在不代表肾的总体状态的区域中进行活组织检查并因此由于该取样而低估或高估患者的真实状况。

此外，鉴于活组织检查不能够以接近的时间间隔系统地进行，该方法也无法使得能够早期地检测病理学状态的出现。另外，实施肾活组织检查是一项花费大的、复杂的、侵入性的且对于患者而言痛苦的操作。

因此，需要找到一种非侵入性的、简单的、经济的、可靠的、早期的且具有最小的对于患者的可能风险的诊断方法。

3.发明目标

本发明的目标尤其在于缓解现有技术的这些缺点。

更确切而言，在至少一个实施方案中，本发明的目标是提供肾病理学状态或具有肾反响的病理学状态的早期诊断方法。

在至少一个实施方案中，本发明的另一个目标是利用非侵入性的诊断方法。

在至少一个实施方案中，本发明的目标还在于利用可靠且精确的诊断方法。

在至少一个实施方案中，本发明的另一个目标是利用对于实施来说简单的诊断方法。

在至少一个实施方案中，本发明的另一个目标是利用更经济的诊断方法。

在至少一个实施方案中，本发明的另一个目标是利用用于追踪治疗的功效和耐受性的方法。

最后，在至少一个实施方案中，本发明的另一个目标是利用对于患者而言疼痛更少的诊断方法。

4.发明说明

这些目标，以及后面将会出现的其他目标，全部或部分地借助于患者中的病理学状态的体外诊断方法来达到。

根据本发明，这样的方法包括下列步骤：

a)获得来自所述患者的尿样品；

b)在所述样品中检测至少一种关于所述病理学状态的标志物和至少一种对于尿道上皮细胞和/或尿道上皮微颗粒而言特异的标志物；和

c)通过用所述至少一种对于尿道上皮细胞和/或尿道上皮微颗粒而言特异的标志物对所述关于所述病理学状态的标志物进行标准化，来测定所述至少一种关于所述病理学状态的标志物的表达阈值。