[发明专利]冻干脂质体

说明书

相关申请

本申请要求2011年10月21日提交的美国申请系列号61/550,047的权益，将其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及生产冻干脂质体的组合物和方法，所述冻干脂质体包含至少两种治疗剂或诊断剂，可以在延长的时间段储存。在一个方面，本发明涉及任选地在包含低温保护剂的外部介质中的低-胆固醇脂质体，所述低温保护剂能抵抗脂质体的冷冻/解冻和脱水损害，因此保持其大小(粒度)和完整性。

背景技术

脂质体是封闭的小囊泡，具有包围水性核芯的至少一个脂质双层。脂质体内的空间和脂质层可以包埋多种物质，包括药物、化妆品、诊断剂、遗传物质和生物活性化合物。由于无毒性脂质充当脂质体的基质，它们通常显示出低毒性。低毒性结合脂质体提高试剂的血浆循环寿命的能力使得脂质体作为对于递送可药用活性剂特别有用的载体。在许多情况下，脂质体-递送的药物得到与毒性降低相匹配的更好的临床功效。

脂质体制剂作为药物递送载体的实际应用受制剂的化学和物理稳定性的限制。商业化需要化学和物理水平两方面的长期稳定性。使用冷冻的或冷冻干燥的(冻干的)制剂以避免破坏不稳定的药物和/或脂质成分在稳定性方面提供了一些改善。然而，在冷冻干燥过程期间，冰晶形成可导致机械性破裂、脂质体聚集和融合(引起脂质体大小增加)。而且，包含冻干药物的脂质体，然后在室温下重构时，其双层结构通常出现变化，这导致加速的药物渗漏。

之前，在制备冻干脂质体组合物方面的尝试依赖于常规脂质体，其在体温下通常为液相，其中脂质的移动是流动的且不受控制的。这样的常规脂质体分成两类。第一类保持液态，因为其包括其中凝胶-至-液体结晶温度(T_c)低于体温的脂质(即，它们将在体温下为液相形式)。现有技术中通常使用这些脂质体，然而；对于许多包封试剂，成为液体的缺点是药物保留性差。

第二类常规脂质体从不进行液体向凝胶的转变，因为其包括高含量的膜硬化剂(membrane rigidification agents)，比如胆固醇(例如30-45mol％)。胆固醇起的作用是增加双层厚度和流动性，同时降低脂质体的膜透性、蛋白相互作用和脂蛋白失稳。在脂质体研究中，最常使用这些高含量的胆固醇，过去已经教导了其对于体内的足够的血浆稳定性和药物保留是必需的，尽管并非所有药物都可以充分地保留。在基本上不含胆固醇的脂质体中，某些药物在体外和体内都显示出更好的药物保留。参见，例如Dos Santos,等人,Biochim.Biophs.Acta,(2002)1561:188-201。

另一方面，凝胶相的脂质体更稳定，且显示出改善的药物保留。本发明利用在体温下为凝胶相的脂质体(即，体温低于脂质体的T_c)。凝胶相脂质体可以采用大量脂质制备；然而，为了在体温下获得凝胶相，采用更饱和的酰基侧链磷脂酰基脂质(比如氢化大豆PC、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)或二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC))制备的凝胶相脂质体需要具有小于30％的胆固醇。在体温下没有显示出凝胶相的常规脂质体的一个实例是蛋黄磷脂酰胆碱(EPC)制备的那些，其是显著渗漏的。

之前，使用常规脂质体制备冻干脂质体组合物的尝试涉及空脂质体或仅包含单一试剂的脂质体。它们可以在脂质体的内部与外部使用低温保护剂，通常为糖，或者使用跨越脂质体膜的大渗透压梯度。

例如，当低温保护剂以足量存在于脂质体的内部和外部时，理论上当这些量相等时，使用低温保护剂防止对包封单一试剂的“液体”EPC脂质体的冷冻/解冻损害。参见，例如美国专利号5,077,056和4,883,665。脂质体内部介质中存在1％-10％的低温保护剂保护包封多柔比星的冻干EPC脂质体-制剂，其中优选地内部摩尔渗透压浓度接近生理学摩尔渗透压浓度。参见，例如美国专利号4,927,571。已经表明在脂质体内部不能包括低温保护剂会导致重构时脂质体完整性丧失，特别是对于保留包封试剂而言。如下列文章中所述：“prevention of leakage requires the sugar be present both inside and outside the liposome(渗漏的防止需要在脂质体的内部和外部都存在糖)”(Lowery,M.(June2002)Drug Development and Delivery,Vol.2,No.4)。