[发明专利]抗体库筛选的一般策略

权利要求书

1.一种分离特异性标记的复制实体的方法，所述方法包括

a)提供在反应混合物中的一组复制实体，其在其表面上展示受体分子的变体且具有与所述表面连接的第一酶或第二酶，

b)如果所述实体与所述第二酶连接，将与所述第一酶连接的配体分子加入到步骤a)的混合物中，或如果所述实体与所述第一酶连接，将与所述第二酶连接的所述配体加入到步骤a)的混合物中，

c)将第二酶的底物加入到反应混合物中，该底物在酶促反应中被所述第二酶利用来生产被所述第一酶利用的产物，将所述第一酶的共底物转变成与各个复制实体物理连接的反应性标志分子，从而特异性标记复制实体，和

d)分离特异性标记的复制实体。

2.根据权利要求1的方法，步骤a)的反应混合物包含能分解所述第一酶和/或第二酶的过剩产物的第三酶。

3.根据权利要求1的方法，其中所述复制实体选自噬菌体、噬菌粒、或细胞。

4.根据权利要求3的方法，其中所述复制实体为酵母细胞，优选为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

5.根据权利要求1的方法，第一酶为过氧化物酶，第二酶为氧化酶，而第三酶为过氧化氢酶。

6.根据权利要求2的方法，第二酶的底物为葡萄糖且产物为H₂O₂。

7.根据权利要求1的方法，所述第一酶的共底物为与标志分子缀合的酪酰胺。

8.根据权利要求7的方法，所述标志分子为生物素、(2,4)-二硝基苯基、荧光素或地高辛配基衍生物。

9.根据权利要求7的方法，所述酪酰胺与标志分子通过可裂解的接头连接，优选二硫键或可被蛋白酶裂解的肽序列，优选以下结构的含可裂解二硫键的生物素酪酰胺：

10.根据权利要求7的方法，所述标志分子为生物素，且分离步骤e)通过在抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白基质上的亲和色谱法完成。

11.根据权利要求7的方法，所述标志分子为荧光素或荧光抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白结合的生物素且分离步骤e)通过荧光激活细胞分选完成。

12.根据权利要求1的方法，其中所述标志分子为生物素且所述分离包括链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白包覆的顺磁颗粒的磁性细胞分选，其中顺磁颗粒与生物素标记的实体结合。

13.一种非天然存在的复制实体，其在其表面上呈现各种受体分子且含有与其表面偶联的酶。

14.权利要求13的实体，所述酶为选自过氧化物酶或氧化酶。

15.权利要求13的实体，其中受体分子为抗体或抗体衍生的片段。

16.试剂盒，其包含底物、共底物和权利要求13的实体。

17.根据权利要求16的试剂盒，所述实体选自噬菌体、噬菌粒、或细胞，细胞优选为酵母细胞，更优选酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，所述受体分子为抗体，与所述实体表面连接的所述酶为葡萄糖氧化酶或辣根过氧化物酶，所述底物为葡萄糖且所述共底物为与标志分子偶联的酪酰胺，优选生物素。

18.以下结构的生物素酪酰胺：