[发明专利]一种检测C型肝炎病毒感染的方法

说明书

本发明涉及C型肝炎病毒(HCV)感染的活体外检测及衍生自病毒的衣壳蛋白的抗原性肽用于此目的的用途。

背景技术

人们早已认识到，C型肝炎病毒感染尤其在输血中是令人担心的健康问题。

为降低输血后的风险，需要在抗体出现之前及在污染后尽可能快地检测病毒本身的存在。该介于污染与血清转化(即出现抗体)之间的时期被称为“血清学窗口期”。

为了找到一种简单、灵敏、特异性、可再现、廉价且容易使用并且可自动进行大规模筛选以首先检测血清学窗口期期间的HCV抗原、然后监测患者在血清转化后的血清学演化的方法，已提出检测抗HCV抗体以及检测HCV抗原。

然而，主要问题在于存在于血清中的抗HCV抗体与经标记的抗HCV抗体之间存在干扰。因此，出于检测所给出抗体的目的，在固相上引入具有与被用于同时夹心(sandwich)检测抗原的经标记的抗体所识别的那些表位相同的表位的靶抗原将使得经标记的抗体不可逆地固定在固相上，且因此使测试产生假阳性反应。

在用于在同一固相上同时检测抗HCV衣壳抗体及HCV衣壳抗原的系统中尤其如此。因此，出于检测抗HCV衣壳抗体的目的，在固相上沉积具有与被用于检测衣壳抗原的经标记的抗HCV衣壳抗体所识别的那些表位相同的表位的衣壳抗原可使得经标记的抗体固定在固相上，且使测试产生假阳性反应。

为了解决干扰问题，申请EP1020727(先端生命科学研究所(Advanced Life Science Institute))提出用于同时测定HCV衣壳抗原及抗HCV衣壳抗体的方法(“组合(Combo)”型测试)，其中用针对衣壳表位的抗体捕获且标记该抗原，所述衣壳表位与用于同时捕获且检测抗衣壳抗体的衣壳表位不同。该申请给出代表性实施例，其中在以间接分析夹心检测抗原及抗体的同时分析中，为了检测抗原，使用针对HCV衣壳的第100位氨基酸(AA)至第130位氨基酸的序列的表位的第一(捕获)抗体以及针对序列AA40-50的表位的第二(检测)抗体，并且为了检测抗体，所使用的捕获抗原就其本身而言含有序列AA1-42及AA66-80。

专利申请WO01/96875(CHIRON)尤其描述了采用N-月桂基肌氨酸作为洗涤剂来同时检测衣壳及抗NS3和NS4抗体的分析。其提及用于同时检测衣壳抗原(夹心法)及抗衣壳和抗非结构HCV蛋白抗体(夹心法，双抗原)的分析。为捕获抗原，使用两种抗体c11-3及c11-7，这两种抗体被认为可识别HCV衣壳的延长的N端部分(AA10-53)，并且为了检测，使用第三抗体c11-14，该第三抗体被认为可识别HCV衣壳的C端部分(AA120-130)。为了检测抗体，所使用的捕获抗原是与超氧化物歧化酶(“SOD”)的片段融合的具有多个表位的融合抗原，其含有抗原NS3、NS4、NS5及一系列来自若干HCV菌株的衣壳序列：带有R47L突变的AA9-53、AA64-88及AA67-84。

专利申请EP1251353(Ortho-Clinical Diagnostics)描述了使用相同抗体来检测衣壳的“组合型完全”分析，但并未说明抗体的来源或其表位特异性。抗衣壳抗体通过以下经修饰(通过诱变)的衣壳抗原来检测：C22KSNV47、48(具有SOD的融合蛋白，其包括第47和48位氨基酸缺失的衣壳序列AA10-99)或C22KSR47L(具有SOD的融合蛋白，其包括衣壳序列AA10-99，且在第47位用亮氨酸替代精氨酸)。

专利申请WO2003/002749(Abbott)描述了多种抗原及用于检测HCV衣壳抗原的分析。其以名称“真实组合(Real Combo)”描述的唯一“组合型完全”分析采用被固定于固相中的对应于衣壳的第11-28位氨基酸的生物素化肽来检测抗衣壳抗体。为了检测衣壳，其采用在固相中的先端生命科学研究所抗体C11-14(识别衣壳序列AA45-50)与经吖啶标记的C11-10(识别衣壳序列AA32-36)的组合。因此，申请WO03/002 749通过两个明显分开即不重叠的衣壳位点(用于检测抗体及抗AA32-36抗体的AA11-28，以及用于检测抗原的AA45-50)来捕获衣壳抗原并捕获抗衣壳抗体。

专利申请EP1 310 512(Ortho-Clinical Diagnostics)描述了使用含有突变衣壳序列的肽，从而消除了与用于检测HCV感染的测试中所用的HCV特异性小鼠单克隆抗体结合的可能性。