[发明专利]利用人源化的小鼠来确定毒性

说明书

相关申请

本申请要求2011年12月6日提交的61/567,466号美国临时申请的优先权。

上述申请的全文通过引用在此引入。

发明背景

由于接近于人体的模型往往无法准确地预测许多不利的影响，临床前和临床试验之间存在明显的差距。在I期临床试验中，施用TGN1412(开发用于治疗自身免疫性疾病的人源化超激动(superagonistic)CD28单克隆抗体(IgG4))导致了与“细胞因子风暴”症状相关的灾难性事件。急需建立一个可以准确地预测这种不利影响的模型。具有增强的人免疫细胞移植特性的免疫缺陷NOD-scid IL2rγnull小鼠给出了一种有吸引力的模型。然而，由于在当前的模型中观察到弱的人类免疫反应，它们的广泛使用受到限制。

因此，需要可以准确地预测药剂(例如，治疗剂)对人体免疫系统的不利影响的改进的模型。

发明概述

通过向小鼠注射人造血干细胞和人细胞因子(例如，人IL-I5和Flt-3L细胞因子)改进人源化小鼠模型的免疫反应。本发明证明，细胞因子处理的人源化(CTH)小鼠模型得以以高保真度预测了在临床中或临床前试验中使用的四种不同单克隆抗体的不利影响。

因此，在一个方面中，本发明涉及一种确定(一种或多种)药剂是否会在人类中引起免疫毒性的方法。该方法包括向已移植人造血干细胞(HSC)和施用一种或多种人类细胞因子的非人类哺乳动物施用该药剂；以及确定药剂是否会在非人类哺乳动物中引起免疫毒性，其中，如果所述药剂在非人类哺乳动物中引起免疫毒性，则所述药剂在人类中引起毒性。

在另一个方面，本发明涉及一种确定施用(一种或多种)药剂是否会在需要的个体(例如，人)中引起细胞因子释放综合征的方法。该方法包括向已移植人造血干细胞(HSC)和施用一种或多种人类细胞因子的非人类哺乳动物施用该药剂；以及确定所述药剂是否会在该非人类哺乳动物中引起细胞因子释放综合征，其中，如果所述药剂在该非人类哺乳动物中引起细胞因子释放综合征，则该药剂在人类中引起细胞因子释放综合征。

附图简要说明

本专利或申请文件包含至少一张以彩色绘制的附图。带有彩色附图的本专利或专利申请的副本将经请求和支付必要费用后由专利局提供。

图1：注射TGN 1412引起一大组全身性促炎性细胞因子产生。在TGN 1412-IgG4(小鼠抗-人CD28抗体5.11A1的人源化形式(同种型：人IgG4/Kappa)，在本文也被称为TGN1412)和TGN1412-AA(小鼠抗-人CD28抗体5.11A1的人源化FcR-非结合形式(同种型：人IgG4/Kappa))处理组的血清中在处理前48小时、注射后2小时和24小时测量细胞因子产生。也将值与盐水注射的对照组进行了比较。通过BD FACSArray分析来测定人白介素-2(hIL-2)、hIL-6、hIL-8、hIL-1β、hIL-4、hIFN-γ和hTNF-α的量。各个符号代表一只小鼠。相同的符号表示在不同时间点的相同的小鼠。n值表示在每一组中使用的小鼠的数目，来自两个独立的实验。

图2A-2B：在TGN1412处理后注意到T细胞和NK细胞百分比和绝对数的变化。在指示时间点对小鼠采血和分析PBMC的人CD45(hCD45)。(2A)显示了按照流式细胞分析，门控于人CD45细胞上的CD3⁺、CD14⁺、CD19⁺、CD56⁺的百分比和门控于来自小鼠PBMC的CD45⁺CD3⁺细胞上的CD4⁺和CD8⁺的百分比的比较。(2B)根据使用血细胞计数仪计算的活细胞数和从流式细胞分析获得的相应细胞群的百分比之间的相关性计算不同细胞谱系的绝对数。