[发明专利]通过抑制MyD88/Erk MAP激酶相互作用的癌症治疗

权利要求书

1.一种用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，包括以下步骤：

a)提供至少一种候选化合物；

b)在适于允许ERK MAPK蛋白和MyD88蛋白在不存在候选分子的情况下相互作用的条件下，将至少一种候选化合物与ERK MAPK蛋白和MyD88蛋白接触；

c)确定在存在和不存在至少一种候选化合物的情况下所测量的ERK MAPK和MyD88的相互作用；和

d)选择抑制ERK MAPK和MyD88相互作用的候选化合物。

2.根据权利要求1所述的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中ERK MAPK和MyD88中的一种或两种与可检测标记物附接。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中使用双杂交系统、亲和层析、共免疫沉淀、大分子复合物的亚细胞分级和分离、免疫印迹、免疫标记，邻近连接测定法、免疫沉淀测定法、Biacore测定法或GST下拉测定法确定ERK MAPK和MyD88的相互作用。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中所述诱导DNA损伤的化疗剂选自：奥沙利铂、顺铂、卡铂、多柔比星、依托泊苷、博来霉素及其混合物。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中所述癌症选自：结肠直肠癌、肠癌、黑素瘤、肺癌和宫颈癌。

6.用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，包括以下步骤：

a)提供至少一种候选化合物；

b)提供在诱导型启动子控制下稳定表达MyD88和在选自SRE启动子、ELK启动子和MyC启动子的来自MAPK途径的启动子控制下表达报告基因的转化细胞；

c)在至少一种候选化合物的存在下，在所述转化细胞中诱导MYD88的过表达；

d)测量所述报告基因的表达并选择至少一种抑制所述报告基因表达的候选化合物；

e)提供通过转染MyD88和Myc癌基因转化的永生化成纤维细胞；

f)监测在步骤d)中选择的至少一种候选化合物的存在下，和在至少一种诱导DNA损伤的化疗剂的存在下的集落形成，并选择增强诱导DNA损伤的化疗剂对集落形成的抑制效果的候选化合物。

7.根据权利要求6所述的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中在步骤b)中，所述来自MAPK途径的启动子是SRE启动子。

8.根据权利要求6-7中任一项所述的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中所述方法还包括以下步骤：

-提供在诱导型启动子控制下稳定表达MyD88和在选自Nf-kB启动子和ISRE启动子的来自炎症途径的启动子控制下表达报告基因的转化细胞；

-在至少一种候选化合物的存在下，在所述转化细胞中诱导MYD88的过表达；

-测量所述报告基因的表达并选择不抑制所述报告基因表达的候选化合物。

9.根据权利要求8所述的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中所述来自炎症途径的启动子是Nf-kB。

10.根据权利要求6-9中任一项所述的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中在步骤b)中，所述细胞选自HCT116细胞系、A375细胞系和HeLa细胞系。

11.根据权利要求6-10中任一项所述的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中所述诱导型启动子是抗生素诱导型启动子。

12.根据权利要求6-11中任一项所述的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中所述永生化成纤维细胞是NIH3T3永生化成纤维细胞。