[发明专利]通过抑制MyD88/Erk MAP激酶相互作用的癌症治疗

说明书

本发明涉及鉴定用于癌症治疗的新颖化合物的方法及抑制MyD88/Erk MAP激酶相互作用以治疗癌症的化合物。

已经完善建立的是炎症起致癌作用的促进者作用。因此，MyD88(TLR信号传导途径的一种接头蛋白)由于其在炎症中的作用而涉及致癌作用。

现在本发明令人惊奇地表明，MyD88在体外和体内在ras依赖性致癌作用中发挥固有作用。具体地，MyD88通过保守基序结合ERK MAP激酶，因此阻断其特异性磷酸酶MKP3对ERK的失活，并导致ras规范途径活性的放大。证实在人类癌症中这种机制的关联性，在许多人类癌症中MyD88表现为过表达并与磷酸-ERK相关。此外，实验数据表明MyD88直接参与ras信号传导途径和由这一癌基因诱导的恶性转化。

MyD88/Erk MAP激酶相互作用抑制剂在肿瘤细胞中诱导凋亡。有趣的是，在MyD88/Erk MAP激酶的抑制剂和诱导DNA损伤的化疗剂之间观察到协同效应。因此，本发明对癌症提供了新的治疗前景，其中，第一线治疗是基于诱导DNA损伤的化疗剂。诱导DNA损伤的化疗剂与抑制MyD88/Erk MAP激酶相互作用的结合在敏感性肿瘤中实现剂量降低，因此增加患者的耐受性或在具有高效DNA修复机制的耐受性癌细胞株中再诱导敏感性。

发明内容

1)本发明涉及一种用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，包括以下步骤：

a)提供至少一种候选化合物；

b)在适于允许ERK MAPK和MyD88在不存在候选分子的情况下相互作用的条件下，将至少一种候选化合物与ERK MAPK蛋白和MyD88蛋白接触；

c)确定在存在和不存在至少一种候选化合物的情况下所测量的ERK MAPK和MyD88的相互作用；和

d)选择抑制ERK MAPK和MyD88相互作用的候选化合物。

2)根据1的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中ERK MAPK和MyD88中的一种或两种与可检测标记物附接。

3)根据1-2中任一项的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中使用双杂交系统、亲和层析、共免疫沉淀、大分子复合物的亚细胞分级和分离、免疫印迹、免疫标记、邻近连接测定法(proximity ligation assay)、免疫沉淀测定法、Biacore测定法或GST下拉(pull-down)测定法确定ERK MAPK和MyD88的相互作用。

4)根据1-3中任一项的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中所述诱导DNA损伤的化疗剂选自奥沙利铂(oxaliplatin)、顺铂、卡铂、多柔比星、依托泊苷、博来霉素(bleomycin)及其混合物。

5)根据1-4中任一项的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中所述癌症选自：结肠直肠癌、肠癌、黑素瘤、肺癌和宫颈癌。

6)用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，包括以下步骤：

a)提供至少一种候选化合物；

b)提供在诱导型启动子控制下稳定表达MyD88和在选自SRE启动子、ELK启动子和MyC启动子的来自MAPK途径的启动子控制下表达报告基因的转化细胞；

c)在至少一种候选化合物的存在下，在所述转化细胞中诱导MYD88的过表达；

d)测量所述报告基因的表达并选择至少一种抑制所述报告基因表达的候选化合物；

e)提供通过转染MyD88和Myc癌基因转化的永生化成纤维细胞；

f)监测在步骤d)中选择的至少一种候选化合物的存在下，和在至少一种诱导DNA损伤的化疗剂的存在下的集落形成，并选择增强诱导DNA损伤的化疗剂对集落形成的抑制效果的候选化合物。

7)根据6的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的方法，其中步骤b)中MAPK途径的启动子是SRE启动子。

8)根据6-7中任一项的用于体外选择能够增强诱导DNA损伤的化疗剂治疗癌症的效果的化合物的方法，其中所述方法还包括以下步骤：

-提供在诱导型启动子控制下稳定表达MyD88和在选自Nf-kB启动子和ISRE启动子的来自炎症途径的启动子控制下表达报告基因的转化细胞；

-在至少一种候选化合物的存在下，在所述转化细胞中诱导MYD88的过表达；