[发明专利]通过三维培养重新编程细胞

权利要求书

1.一种将终末分化的体细胞重编程的方法，所述方法包括：

在允许形成三维细胞聚集体的条件下培养所述细胞，其中所述三维细胞聚集体的形成诱导所述细胞进行重编程。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养体细胞是在低粘附基质上培养所述体细胞。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述低粘附基质包括降低细胞附着的材料。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述材料包括亲水性和电中性的水凝胶层。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述材料选自下组：琼脂、琼脂糖和聚(甲基丙烯酸-2-羟基乙酯)。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述琼脂糖的浓度范围为0.2至5.0％。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述琼脂糖与培养基混合。

8.根据权利要求3所述的方法，其中所述材料包被于所述低粘附基质的表面上。

9.根据权利要求3所述的方法，其中所述材料包括聚苯乙烯。

10.根据权利要求2所述的方法，其中所述低粘附基质包括疏水性表面。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养体细胞是在悬挂在支持材料上的培养基液滴中悬浮培养所述体细胞。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述液滴的体积不超过1ml。

13.根据权利要求11所述的方法，其中所述培养基液滴悬于颠倒的培养容器的底部。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养是在旋转、振荡或静止状态下培养所述体细胞。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养是在缺乏任何支持材料的培养基中培养所述体细胞。

16.根据权利要求1-15任意一项所述的方法，其中所述体细胞选自下组：

HEK293细胞、成纤维细胞和癌细胞。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述成纤维细胞是小鼠胚胎成纤维细胞或尾尖成纤维细胞。

18.根据权利要求1所述的方法，其中所述三维细胞聚集体是多细胞和多层细胞聚集体。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述三维细胞聚集体具有球样形状。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述三维细胞聚集体的直径至少为10μm。

21.根据权利要求1所述的方法，其中所述体细胞被重编程以上调一种或多种干细胞标记物。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述干细胞标记物选自下组：Oct4、Nanog、Sox2、Klf4、c-Myc、Lin28、Rex1、Tdgf1、Leftb、Ebaf、Grb7、Podxl、Nodal、Fgf4、Nestin、Gdf3、Dax1、Slc2a3、Sox1、Olig2和Pax6。

23.根据权利要求1所述的方法，其中所述体细胞被重编程以上调一种或多种转分化标记物。

24.根据权利要求1所述的方法，所述培养体细胞还包括向所述培养物中引入诱导剂。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述诱导剂是能够诱导细胞重编程的蛋白。

26.根据权利要求24所述的方法，其中所述诱导剂是编码蛋白的核酸，所述蛋白能够诱导细胞重编程。

27.根据权利要求24所述的方法，其中所述诱导剂是能够诱导细胞重编程的化合物。

28.根据权利要求1所述的方法，其中所述体细胞是非癌体细胞。

29.根据权利要求16所述的方法，其中所述体细胞是成纤维细胞。

30.根据权利要求1所述的方法，其中所述体细胞被重编程为神经细胞。